| 研究課題/領域番号 |
19K07661
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
新城 恵子 名古屋大学, 医学系研究科, 講師 (40641618)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | EZH2 / 複合体 |
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| 研究実績の概要 |
ヒストンメチル化酵素EZH2 (enhancer of zeste homolog 2) はPRC2（ポリコーム複合体2）の構成タンパク質であり、多くのがんで発現が高いEZH2はがんにおいてPRC2以外のタンパク質と複合体を形成することも知られている。我々はEZH2が過剰発現している複数の腫瘍細胞において、EZH2はヒストン修飾酵素X(protein X)と複合体を形成していることを見出した。この新規EZH2複合体は通常の複合体とは異なる新たな機能を獲得し、悪性化に寄与している可能性がある。本共同研究では、新規複合体の機能解明を目指して実験を行った。
これまでに脳腫瘍 、乳がん、前立腺がん、肺がんなど複数のがん種の細胞株を用いて、この異常複合体が存在することを確認した。EZH2は核内に多く局在するが、EZH2-protein X異常複合体も核内で認めることが分かった。複合体の存在はProximity ligation assay（PLA）でも確認し、複合体を示すPLAのスポットはがん細胞で多い傾向があった。
長鎖非翻訳RNAはヒストン修飾タンパクをクロマチン上にリクルートすることが知られており、EZH2も複数のlncRNAに結合することが報告されている。EZH2-protein X異常複合体形成に長鎖非翻訳RNA が関与しているかを検討するため、細胞から得られたタンパク質を、RNaseAで処理したのち、免疫沈降を行った。RNaseA処理の有無で複合体の存在量は変わらず、タンパク質が直接結合している可能性が考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
複数のがん細胞においてEZH2とprotein X が存在することを、ウエスタンブロットやPLA法で確認した。
今後EZH2とprotein X とを強制発現させた細胞でクロマチン免疫沈降を行い、この複合体による標的遺伝子部位を同定する予定である。強制発現系でのChIPが難しく、予想以上に時間がかかっている。
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| 今後の研究の推進方策 |
EZH2とprotein X とを強制発現させた細胞でクロマチン免疫沈降を行うことで、新規複合体の標的遺伝子を同定する。これにより、複合体の腫瘍での機能を解明することができると考える。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
今年度に強制発現系でのChIPが難しくて、ChIP-seqまでできなかった。未使用額は次年度必要となる試薬代に充当する。
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