| 研究課題/領域番号 |
19K07679
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| 研究機関 | 愛知県がんセンター(研究所) |
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研究代表者 |
梶野 泰祐 愛知県がんセンター(研究所), 分子診断TR分野, 主任研究員 (50723673)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | lncRNA / TP53 / miR-20a |
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| 研究実績の概要 |
我々はこれまでに、肺がんにおいて遺伝子増幅などにより過剰発現するmiR-17-92クラスターを同定し、その標的遺伝子の探索や分子機構の解明を通じ、miR-17-92クラスターの重要性を明らかにしてきた。近年我々はmiR-17-92クラスターの中でも高発現且つ中心的な役割を担っているmiR-20aに着目し、miR-20aによって制御されるlncRNAの網羅的な探索を行った。その結果、機能未知の新規lncRNAを同定し、その作用機序よりTP53-inhibiting lncRNA、TILRと命名した。このTILRはp53の発現を抑制することにより、肺がん細胞の生存を制御するlncRNAであることを明らかにしてきた。本年度はTILRによるp53の制御機構を明らかにするためにTILR結合タンパク質の網羅的な探索と同定を行い、TILR-binding protein 1 (TBP1)を同定した。そこでこのTBP1がTILRと同様にp53の発現を制御するか、siRNAを用いて検討した。その結果、TBP1の発現抑制によってp53の発現が上昇し、さらに肺がん細胞の増殖が著しく抑制されることを見出した。以上の結果から、TILRはTBP1と結合することによりp53の発現を抑制し、がん細胞の生存を制御するlncRNAと考えられる。
また、p21プロモーターのluciferaseアッセイとp53のChIPアッセイを行ったところ、TILR siRNAによってp53のp21プロモーターへの結合が強くなり、その結果p21プロモーターが活性化することを明らかにした。つまり、TILRはp53の発現量を制御することによりp53の活性を抑制していると考えられる。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
肺がんにおいて重要な働きをするILRの機能解析は、TILR結合タンパク質の網羅的な探索並びに分子生物学的手法を通じて順調に進行している。TILRの結合タンパク質の網羅的な探索より、TILR-binding protein 1 (TBP1)を同定し、TBP1がTILRと同様にp53の制御に必須であることを明らかにした。さらにTILRとTBP1の結合様式の分子機序を明らかにするためにin vitroアッセイ系の構築および最適化を開始した。また、TILRによるp53の発現制御とp53の活性の関連性を明らかにするために、p21プロモーターを用いたluciferaseアッセイとChIPアッセイを組み合わせて、TILRがp53の活性を制御することを明らかにした。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでに我々が同定した機能未知の新規lncRNA、TILRの機能解明に向けて、TILR結合タンパク質の網羅的な探索を行い、TILRがTBP1と結合することを明らかにした。今後はその結合様式の詳細な分子機序を明らかにするとともに、TILRとTBP1によるp53制御機構の詳細を解明する。特にがん抑制遺伝子p53は様々な分子機序によりその発現を制御されているため、p53のタンパク質の安定性や翻訳制御などについて検討すると共に網羅的な遺伝子発現プロファイルを行い、TILRとTBP1によるp53の制御の全容の解明を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初の予定より研究計画は３年に跨っており、本年度においてはTILR結合タンパク質、TBP1の同定とそのp53ならびに細胞の生存における重要性について明らかにしてきた。そのため、次年度ではRNAseqなどを用いた網羅的な遺伝子発現プロファイルを行い、TILRとTBP1によるp53制御機構の分子機序を明らかにする予定である。
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