研究実績の概要 |
研究のゴールは、末梢血中のナイーブB細胞をゲノム編集により元々の抗体産生機能を欠失させ、同時に抗体医薬をノックインし産生できる長期生存形質細胞に分化誘導することである。長期生存形質細胞はタンパク質合成能や分泌能に優れており、また自己由来の形質細胞であることから、自己への移植が可能である。長期生存形質細胞は極めて長寿命であり、生着したのち長期間抗体医薬を産生し続けるため、繰り返し薬剤を投与する必要がなくなると考えられる。 本年度は、イムノグロブリン遺伝子(IgH,IgK,IgL)に対するゲノム編集用gRNAの選定を行うため、Webサイト上のCHOPCHOP(https://chopchop.cbu.uib.no/)およびIDT社(https://sg.idtdna.com/site/order/designtool/index/CRISPR_SEQUENCE)のCRISPR-Cas9 guide RNA design checkerを利用した。V(D)J領域は複数あり、ターゲットとしては不適切と考え、定常領域に絞って設計を行った(重鎖:IgM, IgA, IgE, IgG1,2,3,4、軽鎖:IgL, IgK)。軽鎖IgLでは設計出来ず、IgKのみ設計を行った。B細胞におけるIgLとIgKの存在比は1:2とされているので、今後の培養系研究ではIgKを持つB細胞のみで研究を行うこととした。 培養系での実験を行う前にin vitroでのgRNAの実際のDNA切断効果について検討を行った。 今後は、活性化B細胞に対して本年度に選定したgRNAとCas9タンパク質を導入し、イムノグロブリン遺伝子の定常領域を切断、実際に変異導入効率の高いgRNA配列を決定し、抗体産生を除去した形質細胞培養系の確立を行う予定である。
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