| 研究課題/領域番号 |
19K07873
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| 研究機関 | 城西大学 |
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研究代表者 |
岡崎 真理 城西大学, 薬学部, 教授 (50272901)
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| 研究分担者 |
坂本 武史 城西大学, 薬学部, 教授 (20187040)
袁 博 城西大学, 薬学部, 准教授 (10328552)
玄 美燕 城西大学, 薬学部, 助手 (50711751)
岩田 直洋 城西大学, 薬学部, 助教 (50552759)
松崎 広和 城西大学, 薬学部, 助教 (80582238)
日比野 康英 城西大学, 薬学部, 教授 (10189805)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 虚血性脳血管障害 / フェルラ酸誘導体 / 予防的治療薬 / 脳血流維持作用 / 光血栓モデル / 内皮型一酸化窒素合成酵素（eNOS） / 抗凝固作用 / 微小血管内皮細胞 |
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| 研究実績の概要 |
脳梗塞発作は、突発的に生じ、処置が遅れるほど予後不良となることから、発症前からの予防的投与によって発作時の脳保護にはたらく新たな予防的治療薬が必要であると考えられる。天然化合物であるフェルラ酸（FA）の誘導体FAD012は、慢性予防投与によって脳梗塞モデルの脳血流低下を顕著に抑制して梗塞巣形成を縮小するが、その作用メカニズムは明らかではない。そこで本研究では、FAD012の虚血時脳血流維持作用に寄与する分子機構を培養細胞を用いて解明することを目的とした。
これまでの研究結果より、FAD012はeNOSの活性増大を引き起こすことが示唆されていることから、ラット脳微小血管内皮細胞を疑似的虚血状態である低酸素・低グルコース条件下で培養してサンプルを回収し、eNOSの活性化に関わるリン酸化酵素やROCKの活性をWestern Blot法を用いて評価するため、今年度は、細胞の培養条件および障害検出の検討を行った。
また、FAD012併用によるt-PAの治療可能時間域への影響の検討として、ラット血栓性脳梗塞モデルを用いるが、今年度は、モデルの作製方法について検討を行い、中大脳動脈内の血栓形成とこれに伴う虚血障害について再現性を確認した。
加えて、in vitroのフィブリン凝塊試験にてFAD012の血液凝固に対する作用を調べたところ、ダビガトランに匹敵する抗凝固作用を示すことが明らかになった。一方、FAD012には血栓溶解作用は認められなかった。この結果は、FAD012の予防投与は脳梗塞発作を予防し、かつ発作時にはFAD012の脳血流低下抑制作用によって脳保護効果を発揮する可能性を示した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
研究遂行上、必要な機器の導入やセッティングに時間を擁したこと、新型コロナ感染症の影響により、3月から動物実験が実施できなくなったこと等による。
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| 今後の研究の推進方策 |
計画の遅れが生じている以下の二つの項目について、優先して進める。① FAD012によるeNOSの活性増大に関わる細胞内経路の同定については、Akt/PKBキナーゼ、Aキナーゼ、AMPキナーゼ、Cキナーゼ等のリン酸化酵素の活性化やROCK阻害を想定して、阻害剤等を用いて検討する。細胞にFAD012を添加し一定時間培養した後、疑似的な虚血状態として低酸素・低グルコース条件下で培養し、細胞を回収、蛋白質を抽出する。リン酸化eNOSをWestern Blot法を用いて検出し、阻害剤によってFAD012によるeNOSの活性化が抑制されるかを検討する。
② ラット血栓性脳梗塞モデルを早期に確立し、FAD012の予防投与による脳血流維持効果、および虚血誘発後の神経症状、脳梗塞巣形成や脳浮腫、脳微小血管傷害の軽減効果について明らかにする。さらに、t-PAを血栓形成後にタイミングを変えて投与し、FAD012の併用の有無によってt-PAがより遅い投与タイミングでも効果を示すか検証する。
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