| 研究課題/領域番号 |
19K07873
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| 研究機関 | 城西大学 |
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研究代表者 |
岡崎 真理 城西大学, 薬学部, 教授 (50272901)
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| 研究分担者 |
坂本 武史 城西大学, 薬学部, 教授 (20187040)
袁 博 城西大学, 薬学部, 准教授 (10328552)
玄 美燕 城西大学, 薬学部, 助手 (50711751)
岩田 直洋 城西大学, 薬学部, 助教 (50552759)
松崎 広和 城西大学, 薬学部, 助教 (80582238)
日比野 康英 城西大学, 薬学部, 教授 (10189805)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 虚血性脳血管障害 / フェルラ酸誘導体 / 予防的治療薬 / 脳血流維持作用 / 光血栓モデル / 微小血管内皮細胞 / 抗凝固作用 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は、発症前からの予防的投与によって脳梗塞発作時の脳保護にはたらく新たな予防的治療薬の開発を目的としている。当研究グループはこれまでに、フェルラ酸（FA）誘導体であるFAD012の慢性予防投与が、脳梗塞モデルラットの脳血流低下を顕著に抑制し、梗塞巣形成を縮小することを見出しているが、その作用メカニズムの詳細は明らかではない。そこで、FAD012の虚血時脳血流維持作用に寄与する分子機構を検討することとした。
ラット脳微小血管内皮細胞を過酸化水素処理し、疑似的な虚血障害を負荷して誘導した細胞死に対して、FAD012はFAと比較して顕著に強い抑制作用を示すことを見出した。これは、当研究グループが先行研究で明らかにしている、in vivoラット中大脳動脈閉塞再灌流モデルにおけるFAD012の内皮細胞保護効果を裏付ける結果となった。
さらに今年度は、ラット光血栓性脳梗塞モデルの作製法を確立し、コントロールとして用いたFAの予防投与が血栓形成を遅延させ、また、血栓形成後の脳血流量の低下を回復させる効果を示すことを見出した。また、in vitroフィブリン凝塊試験にてFAおよびFAD012の血液凝固に対する作用を調べたところ、両化合物は有意な抗凝固作用を示すことを確認した。現在、光血栓性脳梗塞モデルにおけるFAD012の効果について検討を始めている。
以上、これまでの研究結果から、FAD012の予防投与は、脳血栓形成を抑制して脳梗塞発作を予防し、かつ発作時には血管内細胞を保護し、脳血流低下を抑制することによって脳保護効果を発揮する可能性を示すことができた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
新型コロナウイルス感染症拡大の影響により、動物実験が一時中止になったほか、教育活動おけるコロナ対応に時間をとられてしまい、研究時間が不足したため。
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| 今後の研究の推進方策 |
計画の遅れが生じている以下の二つの項目について、優先して進める。
① FAD012によるeNOSの活性増大に関わる細胞内経路の同定：eNOSの活性化は、スレオニン残基（Thr495）とセリン残基（Ser1177）のリン酸化により生じる。これに関わるリン酸化酵素には、Akt/PKBキナーゼ、Aキナーゼ、AMPキナーゼ、Cキナーゼなどが知られている。また、ROCK阻害はeNOS発現を増大させる。そこで、ラット脳微小血管内皮細胞を用いて、FAD012によるeNOS活性化に関わる経路を阻害剤等を用いて同定する。
② ラット血栓性脳梗塞モデルを用いて、FAD012の予防投与による脳血栓形成抑制効果および脳血流回復効果、および虚脳梗塞巣形成や脳浮腫、脳微小血管傷害の軽減効果について検討する。さらに、t-PAを血栓形成後にタイミングを変えて投与し、FAD012の併用の有無によってt-PAがより遅い投与タイミングでも効果を示すか検証する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
新型コロナ感染症拡大の影響によって研究時間が不足し、実施できなかった実験があったため、次年度使用額が生じた。
次年度は、今年度実施できなかった分の実験を進める予定である。さらに、FAD012には、微小毛細血管の保護作用が示唆されている。これには、細胞死に関わる転写因子や細胞保護因子などの種々の蛋白質発現調節が関与することが推定される。その検証を目的として、ラット初代脳微小血管内皮細胞を用いて、DNAアレイによる遺伝子発現の網羅的解析を行う。得られた結果を定量PCRにて確認した後、FAD012のターゲット分子を推定し、新規誘導体のデザインのための知見とする。
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