| 研究実績の概要 |
腫瘍転移に関わるエクソソームおよび糖鎖をターゲットとした、多発性骨髄腫（multiple myeloma; MM）の新たなバイオマーカー開発を目的として、本年度は、エクソソーム内包蛋白（IL-27刺激）の解析およびエクソソームによる破骨細胞前駆細胞から破骨細胞への分化について、エクソソーム表面糖鎖の関与の検討を行なった。
MM細胞株IM9を、MMの抑制因子IL-27で刺激し、刺激前後の培養上清からエクソソームを回収し、エクソソーム内包蛋白を2次元電気泳動法で解析した。IM9細胞の刺激後に分泌されたエクソソーム内包蛋白は、未刺激と比較してpI 5.0～6.5, 30～75 kDa付近およびpI 7.3,分子量25～70 kDa付近に出現するバンドが減少し、pI 10.0, 60 kDa、pI 9.2, 25～34 kDaのバンドが増加した。pI 9.2, 34 kDaのバンドの増加はIL-6刺激と同様だったが、それ以外はIL-27独自の変化であり、IL-27はエクソソーム内包蛋白の変化に影響を与えていることがわかった。すなわち、これらのバンドに含まれる蛋白が、MMの抑制マーカーとなりうる可能性を示唆した。
次に、MMの合併症である骨融解病変の発症へのエクソソーム表面糖鎖の関与を検討するため、MM細胞が放出するエクソソームが破骨細胞前駆細胞の分化に及ぼす影響を調べた。MM細胞株RPMI8226の培養上清から回収したエクソソームはシアリダーゼにより糖鎖末端のシアル酸を除去したものと、未処理のものを用いた。それぞれを、破骨細胞前駆細胞RAW264.7に添加し、分化の様子を観察した結果、いずれにおいても細胞形態の変化が破骨細胞への分化を示していた。以上より、破骨細胞前駆細胞へのエクソソーム取り込みにエクソソーム表面糖鎖末端のシアル酸は関与しないことを明らかにした。
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