研究課題
パーキンソン病を含めたパーキンソン症候群(PS)は，原因不明の進行性の神経変性疾患であり，未だに有効な治療法はない．PSでは臨床的に鑑別診断が困難な場合が少なくない．この課題解決のためにこれまで申請者らは脳脊髄液を用いたショットガンプロテオミクス解析を行い，PSのひとつである進行性核上性麻痺(PSP)に特異的な診断マーカー候補としChromogranin Bをはじめ36種類の候補分子を得た．また，microRNAアレイ解析によって8個のPSP特異的microRNA候補を得た．本研究では，詳細な臨床情報の整った多数例のPS症例における候補分子，microRNAを測定し，診断マーカーとなるかどうかを明らかにするとともにPS各疾患の臨床症状や予後，薬物への反応性などその相違を知る上での有効性を明らかにし，PSの早期診断，病態解明，治療戦略に資するシーズを得ることを目的としている．ショットガンプロテオミクス解析によって得られているPSP疾患特異的候補分子についてpathway enrich解析を行い，細胞外マトリックス，ECMプロテオグリカン，翻訳後タンパクリン酸など4つのpathwayに関連した12種類の分子について統計学的に有意なenrichな解析結果を得ている．これらの候補分子の一部には，バリアントが存在する分子も含まれており，PSPに特異的な変化を起こしているバリアントを確認するためにWestern blotting法による解析を進めている．また，PSP特異的microRNAについては，多数例の血清中のmicroRNAを用いたqPCRによるvalidation解析を行い一部のmicroRNAにおいて再現性が確認できており，更に多数例での解析を進めている．
4: 遅れている
ショットガンプロテオミクス解析によってPSPに特異的な変化を示す候補についてpathway richment解析によって候補分子の絞り込みを行った．それらの候補についてELISA法にてvalidation研究を計画していたが，アミロイド前駆タンパク，Chromogranin B（CHBG）など一部の候補についてバリアントが存在することが明らかとなり．先ずはWestrn blotting法，HPLC法などによるバイオマーカ候補となるバリアントの検討が必要になった．miRNA解析については，qPCRによる定量が安定しないために試薬の選定，PCR条件の検討に時間を要し研究計画が遅れた．また，COVID-19の感染拡大による診療情勢．海外からの試薬が入手困難な状況が続いていることも研究遅延に影響した．
バイオマーカー候補であるChoromogranin B（CHGB)のバリアントのひとつであるbCHGB_6255が，PSPに特異的な変化を示すバイオマーカ候補であると考えられた．免疫沈降方によるCHGB_6255の精製，アミノ酸配列の同定を行う．多数例での検証を行うためにELISA法，HPLC法などによる定量化システムの確立を目指す．同時にCHGB_6255に特異的な抗体作成を作成し．剖検脳組織を用いた免疫組織学的検索を行う．一方，アミロイド前駆タンパク(APP)のようにバリアントが存在する分子が含まれているが，APPのN末を抗原とする抗体によるWestern blottingにてPSPにおいて特異的な変化を示しているバリアントを確認している．多数例での検証とともにバリアントの同定を目指す．また，疾患特異的な血清中miRNA候補についてのqPCR解析については，条件設定を慎重に検討し，多数例での解析を進める予定である．バイオマーカー候補分子のPathway解析によって得られているカスケードについて培養細胞内にて強制発現/発現抑制を行い，形態学的な変化を観察し．病態に迫る予定である．
研究の進捗が遅れており，試薬等の購入がずれ込んだため次年度使用分とした．速やかに研究計画を推進し，研究費を使用する予定である．
すべて 2020
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神経治療学
巻: 37 ページ: 435-493
