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2020 年度 実施状況報告書

質量分析計によるレジオネラ属菌の同定及び血清型別法の構築・臨床応用

研究課題

研究課題/領域番号 19K07947
研究機関麻布大学

研究代表者

曽川 一幸  麻布大学, 生命・環境科学部, 准教授 (50436440)

研究分担者 古畑 勝則  麻布大学, 生命・環境科学部, 教授 (00308305)
谷口 俊文  千葉大学, 医学部附属病院, 講師 (20724826)
石毛 崇之  千葉大学, 医学部附属病院, 臨床検査技師 (30757315)
小寺 義男  北里大学, 理学部, 教授 (60265733)
研究期間 (年度) 2019-04-01 – 2022-03-31
キーワードレジオネラ属菌 / MALDI-TOF MS / 細菌同定 / 血清型別
研究実績の概要

レジオネラ肺炎による死亡数は依然として高く、呼吸不全を呈する市中肺炎の原因菌に限ると肺炎球菌(18.2%)に次いでレジオネラ菌(14.4%)が多い。レジオネラ肺炎の診断には尿中抗原検査が有用であるが、L. pneumophilia血清1型以外の感度は著しく低い。質量分析計によるL. pneumophiliaやL. pneumophilia以外のレジオネラ属菌の同定一致率は62.26%、66.4%と著しく低い状態である。血清型別検査は頻度の高いL. pneumophilaの血清型1の試薬及び2から14までの型混合ラテックス試薬を用いているため、血清型1は判定できるが2から14までの血清型を個別に判定することは困難である。
令和2年度は質量分析計(MALDI-TOF MS)で同定率の低いL. pneumophilaの同定率の向上を目指して、測定方法を検討した。MALDI-TOF MSにおいて測定方法は、コロニーを直接測定、コロニーにギ酸を添加し測定、コロニーからタンパクを抽出し測定する3通りある。L. pneumophila分離菌株31株を用い各方法での同定率は、コロニーを直接測定で75.9%、コロニーにギ酸を添加し測定で82.8%、コロニーからタンパクを抽出する測定で100.0%であった。L. pneumophilaの同定は、コロニーからタンパクを抽出する測定が最適であった。
令和3年度はL. pneumophiliaの血清型別法をコロニーからタンパクを抽出する測定で構築し、臨床応用を目指す。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

令和2年度は質量分析計(MALDI-TOF MS)で同定率の低いL. pneumophilaの同定率の向上を目指して、測定方法を検討した。MALDI-TOF MSにおいて測定方法は、コロニーを直接測定、コロニーにギ酸を添加し測定、コロニーからタンパクを抽出し測定する3通りある。L. pneumophila分離菌株31株を用い各方法での同定率は、コロニーを直接測定で75.9%、コロニーにギ酸を添加し測定で82.8%、コロニーからタンパクを抽出する測定で100.0%であった。L. pneumophilaの同定において、コロニーからタンパクを抽出する測定を確立した。

今後の研究の推進方策

令和3年度はL. pneumophiliaの血清型別法をコロニーからタンパクを抽出する測定でデータベースを構築し、臨床応用を目指す。
L. pneumophiliaの保存菌株40株(血清型1、2、3、6の各10株)を使用して、血清型別について従来法との相関を確認し、データベースを構築後、新たな臨床分離株40株(血清型1、2、3、6の各10株)を使用して検証する。臨床応用として千葉大学医学部附属病院検査部細菌検査室においてルーチン検査として取り入れる。

次年度使用額が生じた理由

MALDI-TOF MSに使用するマトリックス試薬が年度内に届かなかったため

  • 研究成果

    (5件)

すべて 2021 2020

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 4件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (1件) (うち招待講演 1件)

  • [雑誌論文] Usefulness of the MALDI-TOF MS technology with membrane filter protocol for the rapid identification of microorganisms in perioperative drainage fluids of hepatobiliary pancreatic surgery2021

    • 著者名/発表者名
      Sogawa Kazuyuki、Takano Shigetsugu、Ishige Takayuki、Yoshitomi Hideyuki、Kagawa Shingo、Furukawa Katsunori、Takayashiki Tsukasa、Kuboki Satoshi、Nomura Fumio、Ohtsuka Masayuki
    • 雑誌名

      PLOS ONE

      巻: 16 ページ: e0246002

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0246002

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Fucosylated C4b-binding protein α C chain, a novel serum biomarker that predicts lymph node metastasis in pancreatic ductal adenocarcinoma2020

    • 著者名/発表者名
      Sogawa Kazuyuki、Yamanaka Sakino、Takano Shigetsugu、Sasaki Kosuke、Miyahara Yoji、Furukawa Katsunori、Takayashiki Tsukasa、Kuboki Satoshi、Takizawa Hirotaka、Nomura Fumio、Ohtsuka Masayuki
    • 雑誌名

      Oncology Letters

      巻: 21 ページ: 127-135

    • DOI

      10.3892/ol.2020.12388

    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] 質量分析装置Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometryの細菌同定における内部精度管理実施要領の検討2020

    • 著者名/発表者名
      曽川 一幸, 清祐 麻紀子, 服部 佳奈子, 村田 正太, 渡 智久, 奥村 元, 関口 幸恵, 藤永 あずみ, 中山 智祥
    • 雑誌名

      医療検査と自動化

      巻: 45 ページ: 255-259

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Use of the MALDI-TOF MS for identification of microorganisms causing felis urine samples2020

    • 著者名/発表者名
      Maeda Hiroto、Ishige Takayuki、Watanabe Toshifumi、Sogawa Kazuyuki
    • 雑誌名

      Electrophoresis Letters

      巻: 64 ページ: 11~13

    • DOI

      10.2198/electroph.64.11

    • 査読あり
  • [学会発表] 質量分析装置Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometryの細菌同定における内部精度管理の検討2020

    • 著者名/発表者名
      曽川一幸、清祐麻紀子、服部佳奈子、村田正太、渡 智久、奥村 元、関口幸恵、藤永あずみ、中山智祥
    • 学会等名
      第71回日本電気泳動学会総会
    • 招待講演

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公開日: 2021-12-27  

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