研究課題
1)GD2特異的キメラ抗原受容体(GD2.CAR)トランスポゾンベクターの作製: 異なる抗原認識部位の配列情報とスペーサーあるいはCD28、4-1BBなどの共刺激分子の組み合わせにより、複数のGD2.CARコンストラクトを作成した。作成したGD2.CARを、研究代表者が所有するCD19.CARトランスポゾンベクター(pIRII-CD19.28.z)の CAR配列と入れ替え、GD2.CARトランスポゾンベクターを作成した。さらに、ヒトIL-15の遺伝子も組み込み、遺伝子導入されたCAR-T細胞がIL-15を産生するコンストラクトも作成した。2)piggyBacトランスポゾン法によるGD2.CAR遺伝子の導入およびGD2.CAR-T細胞の培養: 研究代表者らが開発したpiggyBacトランスポゾン遺伝子導入法を用いて、GD2.CAR遺伝子をT細胞に導入し、GD2.CAR-T細胞を培養した。末梢血単核球にヌクレオフェクション装置を用いて、GD2.CARトランスポゾンベクターとpiggyBac遺伝子転位酵素ベクターを導入した。インターロイキン(IL)-7およびIL-15を添加した培地中で培養した。複数のヌクレオフェクション装置を用いて遺伝子導入効率や培養効率をみることで、最適な培養方法の確立を目指した。培養開始14日目にフローサイトメトリーを用いてT細胞上のGD2.CAR発現率を測定し、30-50%の遺伝子導入効率を得ることができた。3)In vitro実験系を用いたGD2.CAR-T細胞の抗腫瘍効果の評価: CAR-T細胞と神経芽腫細胞株をサイトカイン無添加・10%血清存在下で共培養し、GD2.CAR-T細胞の抗原特異性、細胞傷害活性、増殖性を比較し、最適なコンストラクトの選択を試みた。
すべて 2021
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血液内科
巻: 82 ページ: 486-492
医学のあゆみ
巻: 277 ページ: 867-871
