マウスモデルを用いた再生不良性貧血の新規遺伝子機能解析

2020 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 19K08297
• 研究機関: 名古屋大学
• 研究代表者: 成田 敦 名古屋大学, 医学部附属病院, 助教 (20625149)
• 研究分担者: 奥野 友介 名古屋大学, 医学部附属病院, 病院講師 (00725533) ; 高橋 義行 名古屋大学, 医学系研究科, 教授 (40432273)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: 再生不良性貧血 / 網羅的遺伝子解析

研究実績の概要

小児AA患者41症例の全エクソーム解析を通じて、新規遺伝子Xの体細胞変異を2例で同定した。さらに、小児AA140症例についてPyro sequencing法を実施し、8症例（6%）で同様に遺伝子Xの変異を確認した。遺伝子Xの変異マウスモデルを用いて、AAにおける新規遺伝子Xの変異アリルの機能的意義を検討した。
遺伝子Xの変異マウスおよび野生型マウス由来の骨髄細胞を採取し、コロニーアッセイを実施した。10日後にアッセイで得られたCFUGM、BFU-Eをカウントしたが、両者でコロニー増殖能に差異を認めなかった。さらに、遺伝子Xの変異マウスおよび野生型マウス由来の骨髄細胞からRNAを抽出して、RNAシーケンスにより転写産物の発現を比較検討した。遺伝子Xの変異マウスで優位に発現している遺伝子のうち、造血に関与するものはみられなかった。また、AA患者の一部では、T細胞からの免疫攻撃から逃れるためにHLAの欠失がみられることが知られている。遺伝子Xの変異マウス、野生型マウス由来の骨髄におけるMHC（Major Histocompatibility Antigen Complex）の欠失についてFACSCaliberを用いて比較検討したが、いずれもMHCの欠失を認めなかった。
遺伝子Xの変異マウスの増殖優位性を示すために骨髄移植実験を行った。遺伝子Xの変異マウスモデルはB6Nマウス由来である。X遺伝子変異マウス、野生型マウスをドナーとして、BALB/cマウスに競合移植を実施した。AAの病態であるT細胞からの免疫学的攻撃を再現するために、GVHDモデル移植実験を参考にして、BALB/c由来の脾臓（T細胞）を同時に移植した。キメリズム解析により両者増殖能の比較を実施したところ、有意差を認めなかった。以上の結果からは遺伝子Xの変異マウスの血球に増殖優位性はみられないと考えられた。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

当初予定していたコロニーアッセイ、RNAシーケンス、FACSCaliberによるMHC解析、骨髄移植実験を実施した。しかしながら、遺伝子XがAAの病態に与える影響については解明できなかった。

今後の研究の推進方策

これまでの実験結果をまとめて、論文投稿の準備をすすめる。

次年度使用額が生じた理由

新型コロナ流行により予定していた出張がキャンセルになったため。

研究成果

• [雑誌論文] Risk factors for secondary poor graft function after bone marrow transplantation in children with acquired aplastic anemia (2020)
  • 著者名/発表者名: Hama A, Muramatsu H, Narita A, Nishikawa E, Kawashima N, Nishio N, Kojima S, Takahashi Y.
  • 雑誌名: Pediatr Transplant. 巻: 24 ページ: e13828
  • DOI: 10.1111/petr.13828.
  • 査読あり
• [雑誌論文] 再生不良性貧血の診断と治療 (2020)
  • 著者名/発表者名: 成田 敦
  • 雑誌名: 小児科 巻: 61 ページ: 1536-1544
  • DOI: 10.18888/sh.0000001513
• [雑誌論文] 骨髄不全症と遺伝子異常 血球テロメア長測定の臨床的意義 (2020)
  • 著者名/発表者名: 成田 敦
  • 雑誌名: 臨床検査 巻: 64 ページ: 761-765
  • DOI: 10.11477/mf.1542202408
• [学会発表] Viral Reactivations in children with Aplastic Anemia Undergoing Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation. (2020)
  • 著者名/発表者名: Atsushi Narita, Yoshinori Ito, Nozomu Kawashima, Yusuke Okuno, Hideki Muramatsu, Nobuhiro Nishio, Yuka Torii, Juinichi Kawada, Seiji Kojima, and Yoshiyuki Takahashi
  • 学会等名: 第62回日本小児血液・がん学会学術集会
• [学会発表] Reactivation of CMV/EBV is common in patients with severe aplastic anemia treated with rabbit ATG (2020)
  • 著者名/発表者名: Atsushi Narita, Yoshinori Ito, Hideki Muramatsu, Motoharu Hamada, Daisuke Ichikawa, Eri Nishikawa, Nozomu Kawashima, Yusuke Okuno, Nobuhiro Nishio, Yuka Torii, Juinichi Kawada, Hirohito Yamazaki, Shinji Nakao, Seiji Kojima, and Yoshiyuki
  • 学会等名: 第82回日本血液学会学術集会
• [学会発表] Allogeneic stem cell transplantation from alternative donors for children with aplastic anemia (2020)
  • 著者名/発表者名: Atsushi Narita, Hideki Muramatsu, Masayuki Imaya, Ayako Ymamori, Taro Yoshida, Manabu Wakamatsu, Shunsuke Miwata, Koutaro Narita, Hironobu Kitazawa, Rieko Taniguchi, Motoharu Hamada, Daisuke Ichikawa, Eri Nishikawa, Nozomu Kawashima, Yusuke Okuno, Nobuhiro Nishio, Seiji Kojima, and Yoshiyuki Takahashi
  • 学会等名: The 46th Annual Meeting of the European Group for Blood and Marrow Transplantation
  • 国際学会
• [学会発表] Allogeneic stem cell transplantation from alternative donors in children with aplastic anemia (2020)
  • 著者名/発表者名: Atsushi Narita, Masayuki Imaya, Ayako Ymamori, Taro Yoshida, Manabu Wakamatsu, Shunsuke Miwata, Koutaro Narita, Hironobu Kitazawa, Rieko Taniguchi, Motoharu Hamada, Daisuke Ichikawa, Eri Nishikawa, Nozomu Kawashima, Yusuke Okuno, Hideki Muramatsu, Nobuhiro Nishio, Seiji Kojima, and Yoshiyuki Takahashi
  • 学会等名: 第42回日本造血細胞移植学会総会