HBV HBxタンパクのユニークな転写制御機構を標的とした抗HBV化合物の探索

2020 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 19K08439
• 研究機関: 山梨大学
• 研究代表者: 山下 篤哉 山梨大学, 大学院総合研究部, 助教 (00334871)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: HBV / HBx / cccDNA / 抗ウイルス化合物

研究実績の概要

研究代表者らは、先行研究を基にEBウイルスのエピゾーマルベクターシステムを用いたHBｘ抑制化合物のスクリーニング系の構築を試みてきた。昨年度は、一昨年度に引き続きHBVコアプロモーター・エピゾーマル・レポーター細胞株の樹立を行い、HBｘの発現により、その活性が10倍以上に上がるような系の樹立を目指した。具体的には、4-ヒドロキシタモキシフェン処理により、HBｘの発現をONにすることが出来るERT2iCre-loxPシステムを用いたHBｘ発現HepG2細胞を樹立した（ERT2iCre-loxP HBｘHepG2細胞）。更に、ERT2iCre-loxP HBｘHepG2細胞にHBVコアプロモーター・エピゾーマル・レポーターベクターを移入し、安定発現細胞株を100クローン以上樹立した。しかし、いずれも誘導時にはHBｘは高発現するものの顕著なルシフェラーゼ活性の上昇は確認出来ず、現在までレポーター細胞の樹立には至っていない。ただし、研究開始後1年半を以上経過した段階において、抑制化合物のスクリーニング系として使える状態までに至らなかったため、EBウイルスのエピゾーマルベクターシステムを用いたスクリーニング系の構築をしつつ、新たなHBｘの働きを抑制出来る化合物のスクリーニング系の構築の検討も開始した。具体的には、HBVcccDNAの転写活性をモニターすることでHBxの働きを検出出来る幾つかのシステムについて構築中である。

現在までの達成度 (区分)

4: 遅れている

理由

申請書で計画したEBウイルスのエピゾーマルベクターシステムを用いたHBｘ抑制化合物のスクリーニング系の構築は、研究を開始してから1年半を過ぎても確立出来ず、新たなスクリーニング系の確立が必要となったため、当初の計画から遅れている。

今後の研究の推進方策

昨年から、HBVcccDNAの転写活性をモニターすることでHBxの働きを検出出来る幾つかのシステムの構築に着手した。今年度はHBxの働きを抑制出来る化合物のスクリーニング系の構築を確立し、抑制化合物の探索に着手することを目指したい。

研究成果

• [雑誌論文] Deep sequencing analysis of serum hepatitis B virus-RNA during nucleot(s)ide analogue therapy (2021)
  • 著者名/発表者名: Shuya Matsuda, Shinya Maekawa, Yasuyuki Komiyama, Natsuko Nakakuki, Tatsuya Yamaguchi, Yasuhiro Nakayama, Taisuke Inoue, Tadashi Sato, Atsuya Yamashita, Kohji Moriishi, Nobuyuki Enomoto
  • 雑誌名: Hepatology Research 巻: 51 ページ: 39-50
  • DOI: 10.1111/hepr.13574
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Induction of HOX Genes by Hepatitis C Virus Infection via Impairment of Histone H2A Monoubiquitination (2021)
  • 著者名/発表者名: Hirotake Kasai, Kazuki Mochizuki, Tomohisa Tanaka, Atsuya Yamashita, Yoshiharu Matsuura, Kohji Moriishi
  • 雑誌名: Journal of Virology 巻: 95 ページ: e01784-20
  • DOI: 10.1128/JVI.01784-20.
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Cancer-related genetic changes in multistep hepatocarcinogenesis and their correlation with imaging and histological findings (2020)
  • 著者名/発表者名: Masaru Muraoka, Shinya Maekawa, Yuichiro Suzuki , Mitsuaki Sato, Tatsuya Yamaguchi, Taisuke Inoue, Tadashi Sato, Atsuya Yamashita, Kohji Moriishi, Masanori Matsuda, Nobuyuki Enomoto
  • 雑誌名: Hepatology Research 巻: 50 ページ: 1071-1082
  • DOI: 10.1111/hepr.13529
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Establishment of a Cell Culture Model Permissive for Infection by Hepatitis B and C Viruses (2020)
  • 著者名/発表者名: Teruhime Otoguro, Tomohisa Tanaka, Hirotake Kasai, Nobuhiro Kobayashi, Atsuya Yamashita, Takasuke Fukuhara, Akihide Ryo, Moto Fukai, Akinobu Taketomi, Yoshiharu Matsuura, Kohji Moriishi
  • 雑誌名: Hepatology Communications 巻: 5 ページ: 634-649
  • DOI: 10.1002/hep4.1653
  • 査読あり / オープンアクセス