HBV HBxタンパクのユニークな転写制御機構を標的とした抗HBV化合物の探索

2021 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 19K08439
• 研究機関: 山梨大学
• 研究代表者: 山下 篤哉 山梨大学, 大学院総合研究部, 助教 (00334871)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: HBV / HBx / HBV cccDNA / 抗ウイルス化合物

研究実績の概要

研究代表者らは、HBxが核内染色体外環状DNAの維持を制御するとの報告を基にして、核内おいて染色体外環状DNAして維持出来るHBVコアプロモーター ルシフェラーゼ プラスミドをEBウイルスのエピゾーマルベクターシステムを用いて構築し,HBｘ発現によりEBウイルスのエピゾーマルベクターの安定化が増強され、ルシフェラーゼ活性が上昇するかについて様々な条件設定を変えて検討を行ってきた。しかし、HBｘ発現をしても薬剤スクリーニングを行える程度のルシフェラーゼ活性の上昇を得ることが出来ず、最終年度で当初の目的を達成するのは困難であると判断した。そこで、今年度は研究の方向性を変え、HBxの発現調整をしているEnhancer I-X promoterに着目し、Enhancer I-X promoterの下流にルシフェラーゼ遺伝子を挿入したレポーター細胞を構築し、HBｘ発現低下させ、その結果、HBVcccDNAを低下させる化合物の探索を行った。Enhancer I-X promoterレポーター細胞を構築後、市販のFDA-approved Drug Library（1470化合物）をスクリーニングソースとして、Enhancer I-X promoterの転写活性を抑制する化合物を探索し、22種のヒット化合物を見出した。次に、スクリーニングのヒット化合物について、HBV 発現プラスミドを導入したHep2.2.15.7細胞を用いてHBVの増殖抑制活性を検討した。その結果、抗血小板薬Vorapaxar、制吐薬Fosaprepitant dimeglumine、抗精神薬Aripiprazole及びCariprazineが強いHBV増殖抑制活性を示した。更に、これらの化合物は、HBV粒子産生誘導細胞株Hep38.7-tet細胞において、HBV cccDNAを減少させる作用があることを見出した。

研究成果

• [雑誌論文] Inhibitory effect of a novel thiazolidinedione derivative on hepatitis B virus entry (2021)
  • 著者名/発表者名: Tomohisa Tanaka, Kaori Okuyama-Dobashi, Ryoji Motohashi, Hiromasa Yokoe, Kazunori Takahashi, Pattama Wiriyasermkul , Hirotake Kasai, Atsuya Yamashita, Shinya Maekawa, Nobuyuki Enomoto, Akihide Ryo, Shushi Nagamori, Masayoshi Tsubuki, Kohji Moriishi
  • 雑誌名: ANTIVIRAL RESEARCH 巻: 194 ページ: 105165
  • DOI: 10.1016/j.antiviral.2021.105165.
• [学会発表] HBV Enhancer I-X promoterをターゲットとした抗HBV化合物の同定 (2021)
  • 著者名/発表者名: 山下篤哉, 田中智久, 葛西宏威, 森石恆司
  • 学会等名: 第68回 日本ウイルス学会学術集会