| 研究課題/領域番号 |
19K08699
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| 研究機関 | 金沢医科大学 |
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研究代表者 |
古市 賢吾 金沢医科大学, 医学部, 教授 (50432125)
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| 研究分担者 |
和田 隆志 金沢大学, 医学系, 教授 (40334784)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 急性腎障害 / CAGE法 / 疾患特異的iPS細胞 |
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| 研究実績の概要 |
近年、急性腎障害(acute kidney injury; AKI)が、慢性腎臓病の原因としても重要であることが示されてきている。本研究は、臨床上重要な課題である、急性腎障害を対象とし、その修復機序の解明を目指した研究である。本研究は、“修復は発生を模倣する”という考えのもと、腎障害の修復過程と発生過程を比較しながら、研究を進める計画である。そこで、本研究では、疾患特異的iPS細胞を用いた急性腎障害に対する修復機序解明を目的としている。具体的には、急性腎障害モデルマウスの検討とともに、疾患特異的iPS細胞による腎系譜細胞誘導および胎仔マウス解析を行う計画である。
本年度は、研究初年度として疾患特異的iPS細胞から腎系譜細胞への誘導をおこない、サンプル収集と解析を着手した。くわえて、マウス胎仔腎のオープンデータベースを用いた解析も進めている。また、動物実験では、ヘテロノックアウトマウスを用いたマウス虚血再還流モデルを施行した。予定していた腎組織およびRNAサンプルの収集を行い、解析を開始している。胎仔腎器官培養による、経時的なデータの収集も順調に進める事ができた。さらに、転写因子PAX2を標的としたChip-Seq解析も進めている。現在用いている抗体での検索では、収集出来るDNA量が少ない状況である。増幅などの手法を加えて現在解析を進めており、いくつかの候補部位を同定してはいるものの、上記発現遺伝子との関連を明確に示す分子は限られている状況である。
このように、初年度は当初予定していた計画を順調に開始できた。疾患特異的iPS細胞からのCAGE解析など、予定以上の進捗を得ることが出来たものもあるが、Chip-Seq解析の様に調整が必要な部分も出てきている。本年度の計画で、さらなる調整を進める予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は、研究初年度として疾患特異的iPS細胞から腎系譜細胞への誘導をおこない、サンプル収集と解析を着手した。この研究では、1塩基レベルで転写活性を評価できるCAGE（Cap Analysis of Gene Expression）法を用いた解析を進めており発現変動を確認している。マウス胎仔腎のオープンデータベースを用いた解析も進めており、先の疾患特異的iPS細胞から腎系譜細胞によるCAGE解析のデータとの比較を行い、標的遺伝子の絞り込みを進めている。現状では、予定以上の進捗を得ることが出来ている。
また、動物実験では、ヘテロノックアウトマウスを用いたマウス虚血再還流モデルを施行している。これまでの実績も有り、順調にサンプル収集、解析を進めている。胎仔腎器官培養のシステムも確立できた。こちらに関しても、サンプル収集と解析をすすめている。
Chip-Seq解析に関しては、DNA量が少ない状況である。プレリミナリーなデーターは得ることが出来た。次年度以降もう少し方法の改善を検討する。
以上、初年度は当初予定していた計画を概ね順調に開始できた。
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| 今後の研究の推進方策 |
疾患特異的iPS細胞から腎系譜細胞への誘導をおこない解析する研究では、CAGE解析の結果と、マウス胎仔腎のオープンデータベースを用いた解析をあわせて、標的遺伝子の絞り込みを進める。その結果は、マウス虚血再還流モデルおよび胎仔腎器官培養のシステムで検証を行う。Chip-Seq解析に関しては、用いる抗体を変えての検証などを進める。
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