色素細胞に対するZEB2の役割

2021 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 19K08794
• 研究機関: 高知大学
• 研究代表者: 寺石 美香 高知大学, 医学部附属病院, 医員 (40437736)
• 研究分担者: 中島 喜美子 高知大学, 教育研究部医療学系臨床医学部門, 准教授 (20403892) ; 山本 真有子 高知大学, 教育研究部医療学系臨床医学部門, 助教 (20423478) ; 柴田 夕夏 高知大学, 医学部附属病院, 医員 (60795186) [辞退] ; 佐野 栄紀 高知大学, 教育研究部医療学系臨床医学部門, 教授 (80273621)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: Zeb2 / メラニン

研究実績の概要

Mowat Wilson症候群患者のZeb2遺伝子変異がメラニン産生におよぼす影響についてメラノーマ細胞株を用いて検討した。患者に同定されたZeb2遺伝子の変異部位をターゲットにしてsgRNAをデザインし、ピューロマイシン耐性遺伝子およびGFP遺伝子をマーカーとして搭載したプラスミドDNAをリポフェクタミンによりHMVⅡ細胞に導入した。GFP導入細胞を96ウェルプレートで単細胞から培養して34クローンを得たが、PCR法にて変異の入ったZeb2遺伝子は検出できなかった。ピューロマイシン添加により選択された細胞を限界希釈法により単細胞から培養し、44クローン得た。このうちPCR法にてZeb2遺伝子変異の導入を確認できた4クローンについてメラニン分析を行った。Zeb2変異を有するメラノーマ細胞株は正常メラノーマ細胞株に比べ、PTCA( 6.8±2ng/mg vs 33.2±10.6ng/mg)、4-AHP( 74.1±21.5ng/mg vs 339.8±101.5ng/mg)とも有意に低下していたが、4-AHP/PTCA比( 10.9 vs 10.9)には差がなかった。またメラノーマ細胞株のメラニン量にはばらつきが大きかった。そこで、正常メラニン細胞を再度評価した。Cas9 ribonucleoprotein(RNP) complexを用いてelectroporationによりZeb2遺伝子に変異導入を試みた。electroporation後の細胞を引き続き培養し、メラニン分析に必要な1x106個まで増やしてからメラニン分析を行った。Zeb2変異を有するメラニン細胞は野生型に比較してPTCA(1058ng/mg vs 3055ng/mg)、4-AHP(561ng/mg vs 757ng/mg)ともに低く、4-AHP/PTCA比(0.53 vs 0.25)は高かった。

研究成果

• [雑誌論文] Pralatrexate for refractory mycosis fungoides in two Japanese patients. (2021)
  • 著者名/発表者名: Teraishi M, Oguro T, Kusume E, Kobashi H, Sano H, Fujioka A, Yamamoto M, Nakajima H , Sano S
  • 雑誌名: J Dermatol 巻: 48 ページ: 667-671
  • DOI: 10.1111/1346-8138.15761
  • 査読あり
• [学会発表] ZEB2のメラニン合成への関与 (2021)
  • 著者名/発表者名: 山本真有子、柴田夕夏、寺石美香、大湖健太郎、中島喜美子、若松一雅、伊藤祥輔、佐野栄紀
  • 学会等名: 第3回日本白斑学会学術大会