単球で合成されるプロトロンビンが関与する抗リン脂質抗体産生機序の解明

2019 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 19K08876
• 研究機関: 北海道大学
• 研究代表者: 藤枝 雄一郎 北海道大学, 大学病院, 助教 (70790872)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: 抗リン脂質抗体症候群 / 抗原提示 / プロトロンビン

研究実績の概要

向血栓細胞である単球が合成したプロトロンビン(PT)蛋白を、PT/MHC class II複合体として抗原提示し、その複合体を抗リン脂質抗体であるホスファチジルセリン依存性抗ヒトプロトロンビン抗体（aPS/PT）が認識することで、血栓発症の病態に関わるのではないかと仮説を立て、下記実験を行なった。実験1は PTとMHC class IIを強制発現したHEK293T細胞を用いて、PT/ MHC class II複合体が細胞表面に輸送されるかを抗PT抗体とaPS/PT を用いて、フローサイトメリー(FCM)で確認した。Phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA)刺激下でヒト単球細胞（THP1）において、PTのmRNAおよびタンパクが発現すること、さらにPMAで刺激したTHP1およびAPS患者の単球は、抗PT抗体よりも、aPS/PTと強い結合を示すことを確認した。単球でPTが合成される現象が、APSにおいて血栓の契機となるのかを明らかにするためにPTを合成した単球を用いてトロンビン産生能を組織因子の発現、ROTEM(rotational thromboelastometry)で行った。組織因子の発現は確認できたが、ROTEMでは明らかなトロンビン産生の更新は確認できなかった。
これまでPTは肝臓で合成される凝固タンパクとされていたが、以上の結果より単球でもPTが合成され、さらに単球が合成するPTがaPS/PTの抗原である可能性が高いことが示唆された。単球と肝臓で合成されるPTの違いがaPS/PTのantigenicityに寄与しているかどうか、プロトロンビンを合成する単球がAPSの病態にどのように関わっているのかを今後さらに検討を進める。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

プロトロンビン合成単球という新たな単球サブセットが発見された。プロトロンビン合成単球の割合、機能などを検討する予定である。

今後の研究の推進方策

抗リン脂質抗体症候群の患者でプロトロンビン合成単球が存在する患者の特徴を明らかにする。治療前後でのプロトロンビン合成単球の割合の変化を確認する。

研究成果

• [雑誌論文] Factor Xa inhibitors for preventing recurrent thrombosis in patients with antiphospholipid syndrome: a longitudinal cohort study (2019)
  • 著者名/発表者名: Sato T、Nakamura H、Fujieda Y、Ohnishi N、Abe N、Kono M、Kato M、Oku K、Bohgaki T、Amengual O、Yasuda S、Atsumi T
  • 雑誌名: Lupus 巻: 28 ページ: 1577～1582
  • DOI: 10.1177/0961203319881200
  • 査読あり
• [雑誌論文] Has lupus anticoagulant testing had its day? (2019)
  • 著者名/発表者名: Fujieda Yuichiro、Atsumi Tatsuya
  • 雑誌名: Nature Reviews Rheumatology 巻: 15 ページ: 324～325
  • DOI: 10.1038/s41584-019-0218-6
  • 査読あり
• [雑誌論文] Circulating plasmablasts contribute to antiphospholipid antibody production, associated with type I interferon upregulation (2019)
  • 著者名/発表者名: Hisada RYO、Kato Masaru、Sugawara ERI、Kanda Masatoshi、Fujieda Yuichiro、Oku Kenji、Bohgaki Toshiyuki、Amengual Olga、Horita Tetsuya、Yasuda Shinsuke、Atsumi Tatsuya
  • 雑誌名: Journal of Thrombosis and Haemostasis 巻: 17 ページ: 1134～1143
  • DOI: 10.1111/jth.14427
  • 査読あり
• [学会発表] Prothrombin/MHC class II complexes on procoagulant cells are novel immune target for pathogenic antiphospholipid antibodies (2019)
  • 著者名/発表者名: Ohnishi N, Fujieda Y, Kono M, Kato M, Oku K, Bohgaki T, Amengual O, Yasuda S, Hisashi Arase, Atsumi T.
  • 学会等名: 16th International Congress on Antiphospholipid Antibodies (ICAPA)
  • 国際学会
• [学会発表] The prothrombin/MHC class II complexes on procoagulant cells as the novel immune target for pathogenic antiphospholipid antibodies (2019)
  • 著者名/発表者名: Ohnishi N, Fujieda Y, Kono M, Kato M, Oku K, Bohgaki T, Amengual O, Yasuda S, Hisashi Arase, Atsumi T
  • 学会等名: The International Society on Thrombosis and Hemostasis (ISTH)
  • 国際学会
• [学会発表] Discrimination of intracranial vasculitis from thrombotic antiphospholipid syndrome in lupus patients with antiphospholipid antibodies. (2019)
  • 著者名/発表者名: Aso K, Fujieda Y, Sato T, Ohnishi N, Kono M, Kato M, Oku K, Amengual O, Yasuda S, Atsumi T
  • 学会等名: 16th International Congress on Antiphospholipid Antibodies (ICAPA)
  • 国際学会
• [学会発表] IgM antiphospholipid antibodies: long term follow-up and thrombotic risk. (2019)
  • 著者名/発表者名: Sato T, Amengual O, Fujieda Y, Nakamura H, Ohnishi N, Abe N, Kono Michihito, Kato M, Oku K, Bohgaki T, Yasuda S, Atsumi T
  • 学会等名: The International Society on Thrombosis and Hemostasis (ISTH)
  • 国際学会
• [学会発表] Longitudinal efficacy and safety of direct factor Xa inhibitors. in patients with antiphospholipid syndrome. (2019)
  • 著者名/発表者名: Sato T, Amengual O, Fujieda Y, Nakamura H, Ohnishi N, Abe N, Kono Michihito, Kato M, Oku K, Bohgaki T, Yasuda S, Atsumi T.
  • 学会等名: The 16th International Congress on Antiphospholipid Antibodies
  • 国際学会