| 研究課題/領域番号 |
19K08918
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| 研究機関 | 北里大学 |
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研究代表者 |
有沼 良幸 北里大学, 医学部, 講師 (30527437)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 自己抗体 / 血液脳関門 / 全身性エリテマトーデス / 神経精神ループス |
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| 研究実績の概要 |
HUVECを用いて抗Sm抗体が血液脳関門に及ぼす影響を調べた。抗Sm抗体による直接刺激により血液脳幹関門のタイトジャンクション主要構成タンパクであるClaudin-5の減少が認めることが分かった。まずHUVECの情勢に抗Sｍ抗体、コントロールのアイソタイプ抗体を加え、qPCR、ウエスタンブロットにてタンパクの発現および定量を行い、ゼラチンザイモグラフィーを用いてMMP-2の活性化状態を調べた。まず抗Sm抗体、他の自己抗体のコントロールとして抗RNP抗体及びそれら自己抗体のアイソタイプコントロール抗体を用いて刺激を行った。qPCRでは抗Sm抗体、抗RNP抗体ともにClaudin-5およびMMP-2のメッセージの変化を認めなかった。このことはこれら自己抗体は直接的に産生の促進もしくは低下をもたらしているのではない可能性を示していた。次にウエスタンブロットにてClaudin-5の定量を行った。セルライセートを用いて抗Sm抗体のみがClaudin-5の減少を引き起こしていることが証明された。このことはHUVECに直接作用した結果であると考えた。ゼラチンザイモグラフィーを用いたMMP-2活性の測定では、抗Sm抗体による刺激で上清中の活性型MMP-2の割合が減少傾向にある結果であった。これは抗Sm抗体刺激により活性型MMP-2が増加する可能性を示していると考えられた。最後にMMP-2活性を阻害するとされるカプトプリルを抗体刺激とともに添加したところClaudin-5の減少が回復することが証明できた。これら結果よりin vitroでは抗Sm抗体は間接的にMMP-2活性を促しClaudin-5の分解していることが示唆された。またカプトプリルは抗Sm抗体によるClaudin-5の減少を回復させる効果があるものと考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
in vivo実験にまでは到達していないもののin vitro実験については当初の目的がほぼ達成されつつあるため。
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| 今後の研究の推進方策 |
MMP-2の直接阻害による効果の証明を行うことでin vitroの実験が概ね終了するため、まずはHUVECを用いた実験の最終確認を行う。その後、マウスを用いてin vivoで抗Sm抗体の血液脳幹関門に及ぼす影響を確認したい。また抗Sm抗体のエピトープは不明であること、直接的にタンパク合成に関与しておらず何らかの経路を介してMMP-2を活性化しておりこの経路についても追及していく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
本年度予定していた実験のためには少額であり次年度での使用としたため。
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