| 研究課題/領域番号 |
19K09013
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| 研究機関 | 杏林大学 |
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研究代表者 |
宇田川 陽秀 杏林大学, 医学部, 助教 (50533882)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | Gata5 / 内臓脂肪組織 / 高度肥満 / 酸化ストレス |
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| 研究実績の概要 |
これまでに、内臓脂肪では酸化ストレス刺激に対する防御機構の破綻が多くの疾患発症に関わること、Gata5-nullマウスにおいては酸化ストレスが増加していること、が報告されていた。そこで我々は、皮下脂肪に比して内臓脂肪で発現が高い転写因子Gata5は、抗酸化分子の発現を誘導し、酸化ストレスに対する防御機構を調節しているのではないか、という仮説を立てた。本研究では、脂肪細胞特異的Gata5欠損マウスの表現型解析から、内臓脂肪に特徴的な酸化ストレス調節因子としてGata5の機能的意義を検証し、肥満・糖尿病発症のメカニズムの解明、治療法の開発を行う。
今年度は、CRISPR/Casシステムを用いて、Gata5遺伝子を切断するgRNAとloxPをマウス受精卵にインジェクションし、Gata5-floxマウスを作製した。現在、作出したマウスのタイピングを進めている。
次にGata5の標的遺伝子に対するクロマチン免疫沈降アッセイ(ChIP)アッセイをおこなった。これまでに脂肪細胞にGata5を過剰発現させると標的分子の発現が増加することを明らかにしたが、Gata5により直接調節を受けるかについて検討した。まず標的分子のプロモーター領域のGata5結合配列を探索した。転写開始点上流3000bpの間にGata5結合配列が9カ所同定された。9箇所のGata5結合配列においてGata5の結合をChIPアッセイ法で測定した。その結果、Gata5は標的分子のプロモーターに存在するGata5結合配列への結合を増加させて、標的分子の発現を増大させていることが示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
Gata5-floxマウスの作出が難航し、Creマウスとの掛け合わせがだいぶ遅れた為。現在、loxp配列が両側の同一アリルに挿入されたマウスが得られたことから、今後研究が加速していると予想される。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は脂肪細胞特異的Gata5欠損マウスを作成し、酸化ストレスや糖代謝に関する表現系解析を進めると共に、ヒト脂肪組織試料を用いて酸化ストレスに関連した分子の変化を解析していく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
遺伝子改変マウスの作出が遅れ、その他マウスとの掛け合わせや表現系解析が出来なかったため、その費用が次年度に繰り越された為。
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