| 研究課題/領域番号 |
19K09044
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| 研究機関 | 大阪物療大学 |
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研究代表者 |
大西 隆之 大阪物療大学, 保健医療学部, 助教 (30418959)
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| 研究分担者 |
水上 洋一 山口大学, 大学研究推進機構, 教授 (80274158)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | がん幹細胞 / 乳がん |
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| 研究実績の概要 |
本研究では癌幹細胞の様に増殖速度が低下するキネシンタンパクのKIF20B遺伝子変異に着目して、癌幹細胞の細胞分裂や増殖の鍵となる因子を同定することを目的とする。
KIF20Bの遺伝子の変異は増殖速度の減少と多核細胞の増加の表現型を示したことから、癌幹細胞の発生や進展に関わる変異であるという仮説を立てた。この仮説を検証するためにまず、KIF20B変異遺伝子を発現する多核細胞で癌幹細胞の特徴・性質を調べ、癌幹細胞を分離する系を確立する。次に次世代シーケンサーによるRNA-seq解析を行い、多核の癌幹細胞の増殖や維持に関わる候補遺伝子群を同定し、分子機構の解明を目指す。そして同定した遺伝子群の中で癌幹細胞の増殖能を高め、抗癌剤感受性になる鍵となる遺伝子群を同定することを目指す。これまでの研究では様々なTCGAやCOSMICなどのデータベースを使ってKIF20B遺伝子変異について調べ、我々が見出したKIF20B遺伝子変異とよく似た変異が乳がん組織中で検出されていることや、KIF20B遺伝子ががん幹細胞で活性化されているMYCやその上流タンパクであるNotch1との相関があることも確認した。また、KIF20B遺伝子の高発現で予後が悪くなることを確認し、KIF20B遺伝子ががん幹細胞の発生や進展に関わるだけでなく、がんの発生や転移にも関わることが示唆された。
本年度はRNA-seq解析を行うためにKIF20B変異遺伝子を発現する多核の癌幹細胞のcharacterizationと分離する系の確立を試みたが、分離し、確立する系の構築が難航している。現在、CRISPR-Cas9のゲノム編集ツールの技術を利用して、KIF20B変異遺伝子を発現する系の構築を進めている。来年度は多核のがん幹細胞を分離し、RNA-seq解析を行い、がん幹細胞の増殖や維持に関わる候補遺伝子群の同定を目指す。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
昨年度はRNA-seq解析を行うためにKIF20B変異遺伝子を発現する多核の癌幹細胞のcharacterizationと分離する系の確立を試みたが、RNA-seq解析を行えるような良質で多核の癌幹細胞の作製が安定しておらず、条件検討中である。一方、TCGAやCOSMICなどのデータベースでKIF20Bの癌の変異の情報を調べたところ、我々が見出した変異と近い部位において多くの変異が検出されていた。また、KIF20Bの高発現は予後が悪く、KIF20B遺伝子ががん幹細胞で活性化されているMYCやその上流タンパクであるNotch1との相関があることを確認した。本年度はRNA-seq解析を行うためにKIF20B変異遺伝子を発現する多核の癌幹細胞のcharacterizationと分離する系の確立を試みたが、分離し、確立する系の構築が難航している。そこで、現在、CRISPR-Cas9の系を用いたゲノム編集ツールを利用して、KIF20B変異遺伝子を発現する系の構築を進めている。来年度は多核のがん幹細胞を分離し、RNA-seq解析を行い、がん幹細胞の増殖や維持に関わる候補遺伝子群の同定を目指す。
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| 今後の研究の推進方策 |
RNA-seq解析を行えるような良質で多核の癌幹細胞の作製と分離する系を確立し、RNA-seq解析を行い、がん幹細胞の増殖や維持に関わる候補遺伝子群を同定する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
研究を行う拠点である本学の所在地が前年度に引き続き今年度も断続的に緊急事態宣言やまん延防止等重点措置の適用地域に指定されており、予想以上に研究を進めることができなかったために未使用額が生じた。次年度も緊急事態宣言やまん延防止等重点措置の適用地域に指定されることが予想されるが、実験環境を工夫して研究を進めることを目指す。次年度は研究の進展に伴って次世代シーケンサーの解析などの高額な費用が見込まれる。また、研究成果については学会に参加して積極的に発信したい。
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