| 研究課題/領域番号 |
19K09094
|
|---|
| 研究機関 | 徳島大学 |
|---|
研究代表者 |
高須 千絵 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学域), 講師 (70582823)
|
|---|
| 研究分担者 |
齋藤 裕 徳島大学, 病院, 特任助教 (50548675)
森根 裕二 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学域), 准教授 (60398021)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
|
| キーワード | Nrf2 / HCLC |
|---|
| 研究実績の概要 |
MSCからのHLC分化誘導protocolの確立
①2D culture：①-1.3-stepで2D cultureでのADSCの分化の確認、Morphology：顕微鏡にて培養6日目：胚体内胚葉（DE）細胞、培養11日目：肝芽（HE）細胞、培養21日目：肝細胞様細胞(hepatocyte-like cell = HLC)のstepにおけるmorphologic changeを確認できた。①-2.培養5日目の細胞においてStemness genes である OCT4, SOX2の発現は低下し、endoderm cell markerのSOX17、AFP、ALBの上昇を確認した。①-3.培養11日目から21日目において、CYP3A4 luciferase activityは著明に増加し、アルブミン分泌能、アンモニア代謝能が保持されていることを確認した。
②3D culture（cell saicを用いて培養）：②-1.Morphology：顕微鏡にて培養6日目：胚体内胚葉（DE）細胞、培養11日目：肝芽（HE）細胞、培養21日目：肝細胞様細胞(hepatocyte-like cell = HLC)のstepにおけるmorphologic changeを確認。②-2.培養5日目の細胞においてStemness genes である OCT4, SOX2の発現は低下し、endoderm cell markerのSOX17、AFP、ALBの上昇を確認した。②-3.培養11日目から21日目において、CYP3A4 luciferase activityは著明に増加し、アルブミン分泌能、アンモニア代謝能が保持されていることを確認した。アルブミン分泌能、アンモニア代謝能は2D培養に比し、3D培養の方が機能が高いことを確認した。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の研究計画にそって進んでいる。
|
| 今後の研究の推進方策 |
① Balb/cマウスの皮下より採取された脂肪組織から採取したADSCを用いてHLCの分化誘導を行う
②DMFによるHLC分化誘導促進に関する検討
確立したprotocolの各stepにDMFを加え、作成効率改善の検討を行う。Step1/2、2/3、1/3、そして全てのstepで投与を行い比較検討する。その後最も効率が良いprotocolにおいて、3D cultureを行い作成効率の検討を行う。
③分化誘導されたHLCのマウスモデルへの移植
Hand-pickingしたHLC をCCL4肝障害マウスモデルへ経門脈的に移植し、肝障害の改善の程度、アンモニア代謝能につき検討を行う。DMF非投与HLC群（protocol 1）使用）、DMF投与HLC群（protocol 2）使用）、3D culture HLC群（protocol 3）使用）で比較検討を行う。
|
| 次年度使用額が生じた理由 |
（理由）
計画書作成時に購入予定であった消耗品の価格変動のため
（使用計画）
次年度への繰越額は消耗品に使用予定である
|
