研究実績の概要 |
【R1】2D culture、3D culture: cell saicを用いて培養。(1)3-stepで2D culture、3D cultureともにADSCの分化の確認。(2)培養5日目の細胞においてStemness genes である OCT4, SOX2の発現は低下し、endoderm cell markerのSOX17、AFP、ALBの上昇を確認した。(3)培養11日目から21日目において、CYP3A4 luciferase activityは著明に増加し、アルブミン分泌能、アンモニア代謝能が保持されていることを確認した。アルブミン分泌能、アンモニア代謝能は2D培養に比し、3D培養の方が機能が高いことを確認した。 【R2】HLC分化におけるNrf2の発現検討。(1)各STEPにおけるNrf2発現の比較。IFを用いて、Nrf2のtranslocationを評価した。(2)STEP2において、著明なNrf2の活性化(translocation)を認めた。(3)3D HLCでは2Dほどの明らかなtranslocationは認めなかった。 【R3】HLC分化におけるNrf2の役割の解明。(1)2DHLCでsiNrf2では、HLC分化までの期間は通常の21日ではなく、24日要した。(2)Step 1において胚葉転換誘導としてNrf2活性化作用をもつGSK3阻害剤ではなく、一般的に用いられているActivin Aを使用。Activin AではNrf2の核内移行はGSK3阻害剤使用群に比し著明に低かった。また、CYP3A活性は、GSK3阻害剤使用群で最も高く、Nrf2をKOするとGSK3阻害剤を使用してもActivin A使用群と同レベルまで活性は低下した。
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