難治性がん性腹水・胸水治療のための新規免疫細胞療法の開発

2021 年度 実績報告書

• 研究課題/領域番号: 19K09196
• 研究機関: 滋賀医科大学
• 研究代表者: 小島 正継 滋賀医科大学, 医学部, 助教 (10452236)
• 研究分担者: 村田 聡 滋賀医科大学, 医学部, 講師 (90239525) ; 下地 みゆき 滋賀医科大学, 医学部, 技術補佐員 (50796448) ; 目片 英治 滋賀医科大学, 医学部, 教授 (80314152) ; 谷 眞至 滋賀医科大学, 医学部, 教授 (60236677)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: 癌免疫細胞療法 / 免疫寛容 / 腹膜播種 / OX40 / 免疫チェックポイント阻害薬

研究実績の概要

免疫トレランスに打ち勝つ癌抗原特異的CTLを癌性腹水・胸水中の免疫細胞TALから樹立するための研究を継続した。
①HER2/neuに特異的な免疫トレランスマウスモデル（HER2/neu transgenic mouse (neu-N)）を用いた。HER2/neu抗原以外には通常の免疫反応が得られ、ヒト癌患者と類似した免疫環境のマウスモデルである。neu-Nマウス の自発乳癌由来癌細胞株(NT2)をneu-Nマウスに腹腔内注し、腹膜播種性転移を作成、さらに腹膜転移由来がん細胞の腹腔内注を繰り返し、高腹膜播種形成性NT2細胞（p-NT2)を樹立した。p-NT2を用いて癌性腹水モデルを作成した。②癌性腹水からTALを採取。単核球をFicoll法で分離した。③マウスMHC-Class I 抗原提示細胞（T2-Dq細胞）に、HER2/neu の既知のMHC-class I immunodominant peptideであ RNEU420-429をpulseして、CD8＋T細胞を抗原刺激しHER2/neu特異的CTLの誘導を試みた。この時、T細胞補助刺激作用のある抗OX40抗体と免疫チェックポイント阻害作用のある抗PD-1抗体を組み合わせることにより、それぞれの単剤よりもさらに有効にHER2/neu特異的CTLが誘導できた。 ④樹立したTAL由来HER2/neu特異的CTLの抗腫瘍作用をin vitro imaging systemで観察した。p-NT2細胞と樹立したTAL由来CD8+T細胞をそれぞれ別の蛍光色素でラベルし、in vitroで接触培養し、CTLによるp-NT2細胞への細胞傷害の動態（T細胞の接触、T細胞分裂、腫瘍死）をリアルタイムに観察した。⑤誘導HER2/neu特異的CTLの抗腫瘍作用を、CTLをneu-Nマウス癌性腹水中へ細胞移入し、腹膜転移への抗腫瘍効果を観察した。

研究成果

• [雑誌論文] Long-term prognosis of patients with cancer-related genes detected in postoperative peritoneal washings obtained during curative gastrectomy (2022)
  • 著者名/発表者名: Takebayashi Katsushi、Murata Satoshi、Kodama Hirokazu、Kaida Sachiko、Yamaguchi Tsuyoshi、Ishikawa Ken、Shimoji Miyuki、Miyake Toru、Ueki Tomoyuki、Kojima Masatsugu、Iida Hiroya、Maehira Hiromitsu、Shimizu Tomoharu、Tani Masaji
  • 雑誌名: European Journal of Surgical Oncology 巻: 48 ページ: 177～182
  • DOI: 10.1016/j.ejso.2021.05.012
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] Predictors and clinical impact of postoperative diarrhea after colorectal cancer surgery: a prospective, multicenter, observational study (SHISA-1602) (2022)
  • 著者名/発表者名: Ohta Hiroyuki、Miyake Toru、Ueki Tomoyuki、Kojima Masatsugu、Kawasaki Masayasu、Tatsuta Takeshi、Iuchi Takekazu、Kamitani Sumihiro、Shimizu Tomoharu、Mekata Eiji、Tani Masaji
  • 雑誌名: International Journal of Colorectal Disease 巻: 37 ページ: 657～664
  • DOI: 10.1007/s00384-022-04097-8
  • 査読あり / 国際共著
• [雑誌論文] INI1-negative colorectal undifferentiated carcinoma with rhabdoid features and postoperative rapidly growing liver metastases: a case report and review of the literature (2021)
  • 著者名/発表者名: Kojima Masatsugu、Miyake Toru、Ueki Tomoyuki、Ohta Hiroyuki、Kushima Ryoji、Shiohara Masanori、Mizuta Hiroo、Iida Hiroya、Yamaguchi Tsuyoshi、Kaida Sachiko、Takebayashi Katsushi、Maehira Hiromitsu、Nishina Yusuke、Shimizu Tomoharu、Mekata Eiji、Tani Masaji
  • 雑誌名: Surgical Case Reports 巻: 7 ページ: -
  • DOI: 10.1186/s40792-021-01189-5
  • 査読あり / 国際共著
• [学会発表] CD44+ cancer cells in the free peritoneal cavity and surgical manipulation as the cause of gastric cancer-derived peritoneal metastasis (2021)
  • 著者名/発表者名: Andreas Michael Sihombing1, Satoshi Murata1,2, Miyuki Shimoji1, Sakura Nakao1, Katsushi Takebayashi1, Hirokazu Kodama1, Masatsugu Kojima1, Tomoyuki Ueki1, Naomi Kitamura3, Mina Kitamura1, Aya Tokuda1, Toru Miyake1, Eiji Mekata3, Masaji Tani1
  • 学会等名: JCA-AACR
  • 国際学会
• [学会発表] Characterization of Tumor-associated lymphocytes (TAL) in malignant ascites of immune-tolerant mice (2021)
  • 著者名/発表者名: Miyuki Shimoji 1), Satoshi Murata 2), Masatsugu Kojima 1), Mina Kitamura 1), Andreas Michael Sihombing 1), Sakura Nakao 1), Naomi Kitamura 3), Tomoyuki Ueki 1), Katsushi Takebayashi 1), Hirokazu Kodama 1), Aya Tokuda 1), Toru Miyake 1), Eiji Mekata 3), Masaji Tani 1)
  • 学会等名: JCA-AACR
  • 国際学会
• [学会発表] Induction of tumor Ag-specific CTL using tumor-associated lymphocytes (TAL) in malignant ascites of immune-tolerant mice (2021)
  • 著者名/発表者名: Satoshi Murata, Miyuki Shimoji, Masatsugu Kojima, Mina Kitamura, Andreas Michael Sihombing, Sakura Nakao, Naomi Kitamura, Tomoyuki Ueki, Katsushi Takebayashi, Hirokazu Kodama, Aya Tokuda, Toru Miyake, Eiji Mekata, Masaji Tani
  • 学会等名: 第80回日本癌学会
• [学会発表] Crosstalk of microsomal glutathione transferase 1 (MGST1) and CD44 in T3M4 human pancreatic cancer cells on hyperthermic model (2021)
  • 著者名/発表者名: Miyuki Shimoji1, Satoshi Murata1,2, Andreas Michael Sihombing1, Sakura Nakao1, Katsushi Takebayashi1, Hirokazu Kodama1, Masatsugu Kojima1, Tomoyuki Ueki1, Naomi Kitamura3, Mina Kitamura1, Aya Tokuda1, Toru Miyake1, Eiji Mekata3, Masaji Tani1
  • 学会等名: 第80回日本癌学会
• [学会発表] Relationship between CD44-positive cancer stem-like cells and gastric cancer-derived peritoneal metastasis (2021)
  • 著者名/発表者名: Andreas Michael Sihombing1, Satoshi Murata1,2, Miyuki Shimoji1, Sakura Nakao1, Katsushi Takebayashi1, Hirokazu Kodama1, Masatsugu Kojima1, Tomoyuki Ueki1, Naomi Kitamura3, Mina Kitamura1, Aya Tokuda1, Toru Miyake1, Eiji Mekata3, Masaji Tani1
  • 学会等名: 第80回日本癌学会
• [学会発表] Overcoming immune tolerance to tumor antigens and inducing tumor antigen-specific CTLs by combined immunotherapy (2021)
  • 著者名/発表者名: Sakura Nakao, Satoshi Murata, Miyuki Shimoji, Masatsugu Kojima, Mina Kitamura, Andreas Michael Sihombing, Naomi Kitamura, Tomoyuki Ueki, Katsushi Takebayashi, Hirokazu Kodama, Aya Tokuda, Toru Miyake, Eiji Mekata, Masaji Tani
  • 学会等名: 第80回日本癌学会