| 研究課題/領域番号 |
19K09204
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| 研究機関 | 兵庫医科大学 |
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研究代表者 |
宇山 直樹 兵庫医科大学, 医学部, 非常勤講師 (70402873)
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| 研究分担者 |
末岡 英明 兵庫医科大学, 医学部, 助教 (20419831)
須藤 誠 兵庫医科大学, 医学部, ポストドクター (40415427) [辞退]
藤元 治朗 兵庫医科大学, 医学部, 特別招聘教授 (90199373)
波多野 悦朗 兵庫医科大学, 医学部, 教授 (80359801)
岡本 共弘 兵庫医科大学, 医学部, 助教 (00567208)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 肝内胆管癌 / IL-11 / IL-11 receptor-α / gp130 / 増殖能 |
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| 研究実績の概要 |
ヒト肝内胆管癌組織における二種類のIL-11抗体を用いた免疫染色では異なった結果が得られ、再現性のある結果が得られなかった。現在、三種類目の抗体を用いた免疫染色を行っている。ヒト胆管内癌細胞株 （SSP-25, RBE, HuCCT1, TKKK）における IL-11受容体であるIL-11Rα及びgp130 の発現を western blotting で調べたところ、すべてのヒト胆管内癌細胞株で IL-11R及びgp130の発現を認め、 IL-11 に対するレセプターのサブユニットが発現していることを確認した。次にIL-11 (100 ng/mL) の培養ヒト胆管内癌細胞株に対する増殖能をAlamar Blueアッセイにて調べたところ、添加48, 72, 96 時間後に、コントロール群に比べ有意な細胞数の増殖を認めた。
また、マトリゲルコートカルチャーインサート (8mm pore) を用いた細胞浸潤アッセイではIL-11 (100 ng/mL) 添加72 時間後に、コントロール群に比べ、有意な浸潤細胞数の増加は認めなかった。以上のことから、IL-11はヒト肝内胆管癌の増殖因子になりうる可能性があることが考えられた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
免疫染色を何度も行っているが、評価判定が困っている。
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| 今後の研究の推進方策 |
ヒトサンプルを用いた実験では肝内胆管癌症例の血清を用いてIL-11およびIL-11Rαの濃度を測定し、予後との関連を調べる。また、免疫染色では三種類目の抗体を用いて、予後との関連を行う。一方、細胞を用いた実験では、培養肝内胆管がん細胞株にIL-11を添加し、血管新生因子の発現 EMT関連因子発現の変化を調べる。ICC肝内胆管癌組織からThy-1抗体を用いてMACSでCancer associated fibroblast を分離し、IL-11の機能解析を行う予定である。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
免疫染色に悩んでおり、実験が先に進まなかったから。
今後は、血清IL-11およびIL-11Rαの濃度を測定するELISAを購入予定。また、血管新生因子の発現 EMT関連因子発現の変化を調べるためのQRT-PCR用Primer 、CAFｓ分離のためのＭＡＣＳ kit も購入する。
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