| 研究課題/領域番号 |
19K09205
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| 研究機関 | 川崎医科大学 |
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研究代表者 |
羽井佐 実 川崎医科大学, 医学部, 教授 (70322229)
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| 研究分担者 |
猶本 良夫 川崎医科大学, 医学部, 教授 (00237190)
深澤 拓也 川崎医科大学, 医学部, 准教授 (20379845)
山辻 知樹 川崎医科大学, 医学部, 教授 (40379730)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | オルガノイド / 食道癌 / 癌幹細胞 |
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| 研究実績の概要 |
近年、iPS細胞などの多能性幹細胞や切除臓器に含まれる組織幹細胞を活用したオルガノイド研究が発展を見せている（Nature. 493, 318-26. 2013）。オルガノイドは、解剖学的、機能的に生体内の器官に近い特徴を示すことから、これまで困難であった生命現象の解析が可能になってきた。現在、癌の治療抵抗性の原因の一つに癌幹細胞の関与が考えられている。癌幹細胞は抗癌剤や放射線での根絶が難しく、さらにその高い造腫瘍性から再発の原因となるため、当該細胞への標的治療の開発が進められている。近年、食道癌の系統維持型癌遺伝子であるSOX2およびΔNp63は癌における幹細胞性の維持に必要であることが明らかになった。またオルガノイド培養法の進歩により、これらの研究に必要となる組織幹細胞や癌幹細胞の増殖と維持が可能となっている。上記癌遺伝子SOX2およびΔNp63に対するCRISPR interference (CRISPRi)を開発し、食道癌細胞: TE-8に導入することで標的遺伝子発現は阻害され、増殖抑制効果を誘導した。SOX2に対するCRISPRiを発現するリコンビナント・アデノウイルスベクター: Ad-CRISPRiSOX2はTE-8におけるSOX2発現を阻害し増殖を抑制したが、食道扁平上皮癌患者より樹立したオルガノイドに対し有意な抗腫瘍効果は誘導できなかった。また扁平上皮癌で増幅が見られ、発癌と増殖に関与するPIK3CA に対するCRISPRiは、食道癌および肺扁平上皮癌における同遺伝子の転写活性を抑制し、後者の増殖を阻害した。今後、SOX2およびPIK3CAに対するCRISPRiを発現するアデノウイルスベクターの単独、併用下での抗腫瘍効果を、樹立オルガノイドを用いて検討する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
高濃度CRISPRi発現型アデノウイルスベクターの精製が困難であったため。
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| 今後の研究の推進方策 |
食道癌オルガノイドの樹立を進め、各標的遺伝子に対するCRISPRiの単独および併用下での抗腫瘍効果を解析する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
購入試薬が安価に抑えられたため、次年度使用額が生じた。
樹立オルガノイドに対するゲノム解析費用、高濃度アデノウイルスベクター精製費用に使用する
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