| 研究課題/領域番号 |
19K09222
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| 研究機関 | 福島県立医科大学 |
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研究代表者 |
丸橋 繁 福島県立医科大学, 医学部, 教授 (20362725)
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| 研究分担者 |
武藤 亮 福島県立医科大学, 医学部, 助手 (10791478)
鈴志野 聖子 福島県立医科大学, 医学部, 助手 (20816376)
石亀 輝英 福島県立医科大学, 医学部, 講師 (50583358)
清水 裕史 福島県立医科大学, 医学部, 講師 (70553709)
佐藤 直哉 福島県立医科大学, 医学部, 助教 (90622332)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2024-03-31
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| キーワード | 肝スフェロイド / 複合型肝細胞シート / ３D培養 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、細胞間接着を有した肝細胞スフェロイド；Liver tissue-originate spheroids (LTOSs)を用いた複合型肝細胞シート(LTOSsシート)の開発を行なっている。
2021年度から、当講座で行っている肝細胞分離の手法を応用してLTOSsを作製している。分離したLTOSsは、培養1日目よりViabilityの低下を認め、3日以上の培養は困難であった。
原因として、分離後にLTOSsに含まれる肝細胞のうち、ある一定の死細胞が存在することが、細胞活性を有する肝細胞にも悪影響を及ぼすものと考えられた。2022年度からは、LTOSsに接着している死細胞を減らすため、分離条件を検討した。分離時のフィルターを70μmから40μmに変更したところ、分離直後のViabilityは向上した。
また、スフェロイドの生存に必要なサイトカインがLTOｓの培養においても重要な役割を担うと考え、肝細胞のGrowth factor（例えば、HGF、OSMなど）を培養に添加するし、より最適な培養条件を確立する実験を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度実施した実験では、Viabilityの高いスフェロイドを回収することを目的として、LTOSｓの分離方法および培養条件の変更を行った。しかし、3D培養下でＬＴＯＳｓのViabilityを十分に長く維持する最適条件を確立できていない。より最適な分離・培養条件を確立するために時間を要している。
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| 今後の研究の推進方策 |
LTOSs作製・培養の手法を最適化し、より高いViabilityを安定して維持できるLTOSsを得る。また、LTOSsに含まれる複数の細胞を免疫染色により識別し、合成されたタンパク質などの物質をELISA法で定量化して評価することで、成熟した肝組織としての機能を有するLTOSsであることを確認する。
安定したLTOSsの培養方法が確立した後は、免疫不全マウスの皮下、肝表面などに移植し、移植片の形態評価、機能評価を行なう。また、疾患モデルマウスへの移植も検討している。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
他の研究と同時に行なっているため、効率的な薬剤の使用法、動物の購入などにより経費の節減に努めた。また、2021年度に起こった東北地方の地震による当大学の動物実験研究施設の水漏れ、およびCOVID-19感染拡大による修理工事の遅れにより、実験ができない期間があったため、薬剤および動物の購入数が予定よりも少なかった。
来年度は、特殊な培養液やサイトカインなどを使用して3D培養を行う予定であるため、次年度に予算を繰り越した。
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