| 研究課題/領域番号 |
19K09345
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| 研究機関 | 群馬大学 |
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研究代表者 |
門井 雄司 群馬大学, 医学部附属病院, 准教授 (10292591)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 術後認知機能障害 / 高齢者 / サイトカイン / アミロイドタンパク |
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| 研究実績の概要 |
2019年度はImmunohistochemistry法を用いたβ amyloid proteinの脳内発現部位の決定を行った。Wistar系Rat(250-300g)を用いて、高齢ラットとしては24週ラット、若年ラットは7-8週ラットを使用した。セボフルラン１MAC麻酔下に、小開腹モデル（腹部を1-2cm切開）を作成する。コントロールラットはセボフルラン１MAC麻酔を行ったが小開腹を行わないモデルとした。２時間麻酔後にセボフルラン麻酔下にRat脳を４％ハラホルムアルデヒドで還流固定。固定２時間後にRat脳を取り出し、クライオスタット(Leica CM1900)を使用して10μmの脳スライスを作成。作成した脳スライスにABC法を用いたImunohistochemistry法で測定した。組織片中の内因性のperoxidaseをブロックするために0.3％H2O2を30分間投与。Phosphate buffer solution (PBS;pH=7.4)で洗浄後、3％のnormal goat serumで抗原を固定。1000倍に希釈した１次抗体であるamyloid protein抗体（アマシャム社製品）で24時間撹拌。PBSでその脳スライスを洗浄した後、Avidin-Biotin Complex(ABC kit:アマシャム社製)を投与し発色させ1時間後にHematoxilinでConter染色する。Conter染色することで脳のどの神経細胞により多く発現しているか観察を実施した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
β amyloid proteinの発現が高齢ラットに多いことが観察されたが、若年ラットとはその発現量が有意差は認めなかったために、さらなる症例数を増加させて検討しようと考えているが、実験方法も変更を考えている。
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| 今後の研究の推進方策 |
高齢ラットでは海馬において若年ラットと比較してβ amyloid proteinの発現が多いことが観察されたが有意差は認めなかったために、さらなる症例数を増加させて検討中である。Wester blot法で海馬での発現総量を比較検討する方向にもっていく。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
β amyloid proteinの発現が高齢ラットに多いことが観察されたが、若年ラットとはその発現量が有意差は認めなかったために、さらなる症例数を増加させて検討しようと考えているが、実験方法も変更を考えている。
さらなる動物実験を行い、β amyloid proteinの発現に有意差が出る方法検討するための手法を模索中である。
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