| 研究課題/領域番号 |
19K09772
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
立花 眞仁 東北大学, 医学系研究科, 准教授 (30431571)
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| 研究分担者 |
志賀 尚美 東北大学, 大学病院, 講師 (20595558)
渡邉 善 東北大学, 大学病院, 講師 (40722567)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | がん生殖 / 卵子凍結 / 核移植 / 細胞質移植 |
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| 研究実績の概要 |
本年度は１１のSTRマーカーによる兄弟胚の同定、兄弟胚からの産仔獲得、兄弟胚からのES細胞樹立、凍結融解を行った場合の、hPB1T法と極体を除去したMII卵子の組み合わせとaPB1T＋単離紡錘体凍結の2つの比較検討を行った。また、PB1T卵子の紡錘体の免疫染色による形態評価を行った。セントロメア近郊の騒動組み換えを起こしにくい11マーカーを選択することにより、ブラインドで提出したMII紡錘体と極体遺伝子の組み合わせを同定することが可能であった。しかしながら、兄弟胚からの産仔とES細胞樹立には至らず、ESについては樹立にむけた継代の最中である。また、凍結融解の効率はhPB1T法と極体を除去したMII卵子にて良好であり、ｈMB1T卵子の分だけ受精に寄与する卵子の増加と胚盤胞の増加が期待された。
実験期間をとおしてのまとめと概要としては、モデル動物として使用したマウスにおいては、極体の凍結融解脆弱性が明らかとなり、凍結に先行して紡錘体形成する必要性があり、極体をドナー卵子へ移植するhPB1Tと自己の細胞質へ移植するaPB1T＋単離紡錘体凍結の2つの方法を比較検討した。aPB1Tは過去に報告がなく、hPB1Tと比較したところ、卵子の再構築率はaPB1TにおいてhPB1Tと比較して優位に高率であったが、受精後の胚発育は差を認めなかった。凍結融解の効率を比較したところ、hPB1T法と極体を除去したMII卵子の組み合わせにおいて、MII卵子単独の場合と比較して凍結融解後に41%ポイント受精に寄与する卵子の増加に寄与し、移植可能な胚盤胞を17.4%ポイント増加させることが明らかとなった。前述のとおり、一つの卵子に由来するMII紡錘体と極体に由来する兄弟胚からの産仔獲得とES細胞樹立は期間内に獲得には至らなかったが、ES細胞は樹立途中であり、論文投稿までに樹立し、ES細胞による遺伝子発現などの比較検討が可能であると思われる。
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