研究課題
前年度ルシフェラーゼアッセイを用いて同定した、LRH-1遺伝子上流域に結合して卵巣・顆粒膜細胞においてLRH-1の転写を制御する可能性が示唆された転写因子（6種類）が、実際に生理的に機能しているかをヒト顆粒膜細胞由来のKGN細胞において確認した。このために、候補となる転写因子をレトロウイルスにより発現させたり、内因性の転写因子を活性化・抑制する化合物を培地に添加した時のLRH-1の発現をリアルタイムPCRにより定量化した。すると候補転写因子のうち、核内受容体スーパーファミリーに属する2種類の転写因子が、レトロウイルスによる過剰発現でLRH-1の発現を著しく上昇させた。これらの転写因子のヒトやマウスの顆粒膜細胞における内因性の発現を調べたところ、１つ転写因子の発現はLRH-1の発現パターンと非常に相関性があったのに対し、もう一方の転写因子は顆粒膜細胞における発現が低いことが分かった。よって、LRH-1の発現と相関が高い発現を示す転写因子が顆粒膜細胞におけるLRH-1の発現を制御している可能性が強く示唆された。さらに、KGN細胞において、この転写因子の発現ををsiRNAをトランスフェクションすることによりノックダウンを行ったところLRH-1の発現が低下したことからも、内因性に発現している転写因子がLRH-1の発現を制御していることが分かった。この転写因子のノックアウトマウスのメス個体では、LRH-1のノックアウトマウスと同様に、排卵障害が生じることが知られていることは、今回の実験結果を強く支持するものである。
2: おおむね順調に進展している
卵巣・顆粒膜細胞において、LRH-1の発現を制御する転写因子を同定したことから、当初の計画通り順調に進んでいると言える。
間葉系幹細胞に、KGN細胞においてLRH-1の転写を制御する因子をアデルウイルス或いは、レトロウイルスを用いて強制発現する。これにより、間葉系幹細胞にLRH-1の発現が誘導されて、ステロイドホルモン産生細胞に分化するかを、培地中に含まれるステロイドホルモンをELISAで測定したり、ステロイドホルモン産生関連酵素の発現をRT-PCR方で調べることにより確認する。さらに、この転写因子のノックアウトマウス卵巣・顆粒膜細胞においてLRH-1の発現低下が見られるかを定量RT-PCRやウエスタンブロティング、免疫組織化学等により解析する。
今年度は、大學の動物飼育棟の改装とコロナ感染の影響で実施不可能であったノックアウトマウスの解析が見込まれることから、その費用を繰越したため。
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すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (6件) (うち国際共著 1件、 査読あり 6件、 オープンアクセス 4件) 学会発表 (9件) (うち国際学会 2件、 招待講演 2件) 備考 (1件)
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