| 研究課題/領域番号 |
19K09838
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| 研究機関 | 大阪医科大学 |
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研究代表者 |
田中 智人 大阪医科大学, 医学部, 講師 (90411363)
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| 研究分担者 |
林 正美 大阪医科大学, 医学部, 准教授 (00551748)
大道 正英 大阪医科大学, 医学部, 教授 (10283764)
田中 良道 大阪医科大学, 医学部, 講師 (10625502)
恒遠 啓示 大阪医科大学, 医学部, 講師 (70388255)
佐々木 浩 大阪医科大学, 医学部, 講師 (80432491)
古形 祐平 大阪医科大学, 医学部, 助教 (80829953)
寺井 義人 大阪医科大学, 医学部, 非常勤講師 (90278531)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | PDX / Te-EVs / エクソソーム / 卵巣癌 / 卵巣癌 / 子宮頸癌 |
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| 研究実績の概要 |
1.Patient derived xenograft (PDX) modelの樹立
婦人科癌のPDX生着率は子宮頸癌で50% (8/16)、子宮体癌で51.8% (28/54)、卵巣癌で44.1% (15/34)であった。悪性度の低いものはnudeマウスには生着しにくくscidマウスにのみ生着したが、悪性度の高いものはnudeマウスにも生着した。次に、原発巣とPDXの腫瘍特性を子宮頸癌で比較した。HE染色では同様の組織像を示し、免疫染色でも子宮頸癌に特有のP16は強陽性を継体していた。次世代シーケンサーによるDNA変異解析では、原発巣とPDXの遺伝子変異は類似しており、腫瘍特性を継体しているものと思われる。一方でPTENやRASなど、PDXのみでsynonymousを認めるものがあった。
2.Tissue-exudative extracellular vesicles (Te-EVs)の解析
正常組織と腫瘍組織から放出されたTe-EVsを比較するため、卵巣明細胞癌を対象に解析を進めた。卵巣明細胞癌4例の正常卵巣および卵巣癌からTe-EVsを採取しNanoparticle tracking analysisおよび電子顕微鏡でEVsの抽出を確認した。これらのTe-EVs内に含まれるmiRNAについてマイクロアレイ解析を行い、4症例全てにおいて正常卵巣組織と比較し明細胞癌組織で高発現を認めたmiRNAを49種類（miR-200 familyおよびmiR183-96-182 clusterを含む）を同定した。同定した49種類のmiRNAのうちmiR-30a-5pについて、患者血清を用いreal-time PCR比較したところ手術前と比較し手術後で低下を認めた。今後49種のmiRNAを患者およびPDXマウス血清を用いて絞り込み、癌特異的なmiRNAを同定する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
PDXモデルに関しては、樹立に成功し、高い生着率を示している。また、生着後も腫瘍の特性を継体していることを確認した。Te-EVsに関しても、採取に成功し、miRNA解析を施行できている。
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| 今後の研究の推進方策 |
1.PDX model
子宮内膜癌および卵巣癌での腫瘍性質継体の確認、および、継体を繰り返した場合の腫瘍の変化を検討する。また、腫瘍の保存が行えれば、迅速に研究が行えるため、PDX保存とその再生方法を検討していく。
2.Te-EVs
卵巣明細胞癌のTe-EVs内に同定した49種のmiRNAを、術前術後の患者血清およびPDXマウス血清から回収したTe-EVsを用いて絞り込む。同様の検討を子宮頸癌、子宮内膜癌でも行い、癌特異的なmiRNAを検索する。検索したmiRNAの機能解析を行うとともに、Te-EVs内のmiRNA以外の蛋白質や脂質代謝産物についても解析をすすめる。
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