| 研究課題/領域番号 |
19K09895
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| 研究機関 | 横浜市立大学 |
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研究代表者 |
佐野 大佑 横浜市立大学, 医学部, 講師 (10620990)
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| 研究分担者 |
波多野 孝 横浜市立大学, 附属病院, 助教 (40807583)
折舘 伸彦 横浜市立大学, 医学研究科, 教授 (90312355)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | HPV関連中咽頭癌 / スーパーエンハンサー / 遺伝子発現制御 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は，HPV関連中咽頭発癌機構における，スーパーエンハンサーを介した遺伝子発現 制御の詳細を明らかにするために以下の研究を行う。1. ChIP-seqによるHPV関連中咽頭癌細胞におけるスーパーエンハンサーの同定 2. スーパーエンハンサーにより発現制御される遺伝子の機能解析 3. スーパーエンハンサー阻害剤，ならびにスーパーエンハンサー領域を欠失させた際の影響
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
令和1年度はHPV関連頭頸部癌細胞株を用いて，スーパーエンハンサーの構成因子に対する抗体によるChIP-seqを行い，HPV関連中咽頭癌細胞におけるスーパーエンハンサーの局在を調べる予定であったが，ChIP-seqを行うための準備に時間を要しているため，本課題で行う予定であったアプローチではなく，Open databaseを用いたバイオインフォマティクスのアプローチにより，HPV関連中咽頭癌の発がん機構の調節を担っている遺伝子同定（遺伝子X）を試みている。
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| 今後の研究の推進方策 |
上記のように同定されたX遺伝子について，臨床検体における発現，細胞株におけるX遺伝子の発現抑制，ならびに強制発現による影響の検討を行う。まずゲノム編集手法であるCRISPR/Cas9法を用いて，X遺伝子をknockoutしたHPV関連頭頸部癌細胞株を作製 し，proliferation assay，migration assay, フローサイトメトリーを行うことで，細胞増殖，遊走能，アポトーシスについてコントロール細胞株と比較検討する。続いてCRISPR/Cas9法を用いて，X遺伝子をknock-inしたHPV関連頭頸部癌細胞株を作製し，同様にproliferation assay， migration assay, フローサイトメトリーを行うことで，細胞増殖能，遊走能，アポトーシスについてコントロール細胞株と比較検討する。さらにHPV関連中咽頭癌臨床検体における，X遺伝子がコードするタンパク発現の予後における寄与について，当施設で手術加療を施した頭頸部癌 患者の検体におけるX遺伝子がコードするタンパク発現の免疫組織学的評価をし，全生存期間との相関について調べる。
続いてスーパーエンハンサーの不活化による影響の検討を，スーパーエンハンサーを構成するBETファミリー蛋白を阻害する薬剤の一つで用いることで，X蛋白発現と細胞増殖能，遊走能，アポトーシスへの影響を調べる。さらにX遺伝子上流に存在するスーパーエンハンサー領域にガイドRNAを設計したCRISPR/Cas9法により，HPV関連頭頸部癌細胞におけるスーパーエンハンサーを欠失させ，その際のX遺伝子発現，細胞増殖能，遊走能，アポトーシスへの影響について調べる。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初予定していた解析を行わなかったため次年度使用額が生じた。
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