| 研究課題/領域番号 |
19K10003
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| 研究機関 | 久留米大学 |
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研究代表者 |
平田 憲 久留米大学, 医学部, 客員教授 (60295144)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| キーワード | 実験近視 / 脈絡膜 / FIB/SE / 非血管性平滑筋 |
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| 研究実績の概要 |
本研究では、申請期間にヒヨコの実験近視眼を用いて1正常組織のNVSMCsとlacunaeの構造を明らかにすること、2実検近視におけるNVSMCsとlacunaeの構造変化 を明らかにすること、3種々の薬剤によるNVSMCsとlacunaeへの影響と近視発生メカニズムへの関与について明らかにすることであった。
2021年度は、ヒヨコ脈絡膜NVSMCs/lacunaeの構造について引き続き検討を行った。固定後のヒヨコ脈絡膜組織を過酸化水素水による脱色を行い、α-smooth muscle actin（αSMA)に対する免疫染色とリンパ管内皮 マーカーであるPROX-1およびpodoplaninに対する染色をおこなった。試料は透明化処理を行い、伸展標本を作成し観察を行った。αSMAの染色は、血管平滑筋に加え、脈絡膜間質に散在しており、NVSMCsと考えられたが、lacunaeを構成するリンパ管様組織周囲の局在は不明瞭であった。
PROX-1の局在の再検討ではヒヨコ脈絡膜内層の毛細血管板の一部のみに見 られ、リンパ管様構造では染色されなった。 podoplaninに対する染色性も同様に検出されなかった。 FIB/SEMを用いた、脈絡膜毛細血管板、脈絡膜間質、lacunae、強膜-脈絡膜移行部の脈絡膜微細構造の解析も引き続き行った。対象眼および実験近視眼の間に明らかな細胞の配列、細胞間接合における差異は見られなかった。SEMを用いた脈絡膜毛細血管版におけるfenestraeの数においても明らかな差は見られなかっ た。Lacunaeはリンパ管特有のマーカーでは明瞭な染色は見られなかったが、SEMによる内腔の直接観察では、非常に薄い一層の内皮細胞による裏打ち構造は明ら かで、細胞間隙は一部にgap構造が見られた。FIB/SEMをもちいたヒト内境界膜および水晶体嚢の微細構造の解析も行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
202１年度も、前年度に引き続きNVSMCsとlacunaeの対象眼と実験近視眼の構造の比較が主目的であった。
免疫染色による光学顕微鏡的観察では脈絡膜内に存在する細胞群、 とくにNVSMCsの免疫染色による局在を検索したが、lacunaeを構成するリンパ管様組織との関連が解明できなかったこと。
SEM用にエポン包埋標本も同時に作製し、NVSMCsの三次元的微細構造解析および脈絡膜毛細血管のfenestraeの定量解析を行ったが、正常眼と近視眼間で有意差は見られなかったこと。
FIB/SEMによる３次元的な脈絡膜組織の微細構造の解明を行ったが、近視発生に関連するとされる近視群における特徴的な構造を検出することが困難であったこと。
が挙げられる。
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| 今後の研究の推進方策 |
当初の計画通り、NVSMCsとlacunaeの正常構造および実検近視眼の脈絡膜のFIB/SEMによる時系列変化の解析を今後も継続していく。さらに長期的な脈絡膜変化(lacquer cracksをはじめとする、近視特有の病変発生時の脈絡膜の構造変化)についても検討を重ねる。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初の予定では、本年度で実験を終了予定であったが、先に記載したごとく、次年度も引き続き、当該研究を継続していく予定で、すでに延長申請を行った。
実験動物および標本作成に要する実験試薬のための経費、さらに論文作成時の校正料および論文投稿料として次年度に一部経費を計上した。
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