| 研究実績の概要 |
近年、エクソソーム（Exosome）と呼ばれる細胞外小胞（細胞から分泌される小さな膜結合小胞）とexosomeに含まれるexosomal miRNAが様々な疾患の病態プロセスに関与していることが明らかとなってきている。特に、exosomal miRNA-21は多様な疾患の進行又は抑制システムとして働いていることが明らかになっている。本研究では、難治性創傷の遅延性炎症反応におけるexosomal miRNA-21 とインフラマソームの相互作用を解明することで、慢性炎症についての新たな知見を得ることを目的とした。
マウスマクロファージ細胞を用いて、miRNA-21 とインフラマソームの相互作用を検討している。マクロファージ細胞へLPSとATPにより刺激をあてえて、インフラマソーム活性化をおこした。Real-time PCR法と免疫ブロット法によりインフラマソーム蛋白であるNLRP3, Caspase-1, IL-1β, IL-18遺伝子の発現プロファイルを得た。LPSとATPによるインフラマソーム蛋白の発現が遺伝子レベルより蛋白質レベルで増加することが明らかになった。
一方、マクロファージ細胞を用いてmiRNA-21の過剰発現又は発現抑制細胞モデルを作成した。細胞にmiRNA-21遺伝子と抗生物質puromycin耐性遺伝子を含むプラスミドを導入し、puromycin抗生剤によりmiRNA-21の過剰発現した細胞を単離した。同じく、MiRNA-21の拮抗物質anti-miRNAをマクロファージ細胞へ導入し、miRNA-21発現抑制細胞モデルを作成した。
現在、それそれ細胞から分泌されるexosomeを採取し、無感作(ナイーブ)マクロファージ細胞へ導入し、受給細胞でのNLRP3, Caspase-1, IL-1β, IL-18とmiRNA-21の発現プロファイルを得るところである。
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