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本研究は、申請者の研究チームが今までに見出してきた血管内皮細胞の特性を規定する4種類のCUL3型ユビキチンリガーゼ複合体の血管奇形及び、皮膚組織における発現解析を軸に、当該タンパク質複合体の機能解析を目的としている。1年目及び、2年目までに、臨床検体を用いた組織染色の解析を通して、CUL3型ユビキチンリガーゼ複合体の足場タンパク質の一つであるSPOPが血管内皮細胞及び、ケラチノサイトに高発現している事を見出してきた。そこで、3年目においては、SPOPの細胞レベルでの機能を不死化された正常皮膚角化細胞であるHaCaT cellsを用いて調べた。SPOPに対する2種類のsiRNAをトランスフェクションにより、HaCaT cellsに導入した結果、細胞増殖が著しく阻害された。これらの結果は、SPOPが細胞増殖に関与する標的基質タンパク質をユビキチン化して、角化細胞の細胞増殖を制御している事を示唆していた。そこで、SPOPの標的基質タンパク質を同定するために、愛媛大学プロテオサイエンスセンターが保有するヒトプロテインアレイとSPOPとの結合アッセイをアルファスクリーンを利用して行った。その結果、SPOPの既知基質タンパク質に加え、新規な結合タンパク質の同定に成功した。現在、SPOPのHaCaT cells及び、内皮細胞における細胞機能解析と、新規ユビキチン化基質タンパク質の同定とその性状解析に関する論文を作成中である。
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