研究課題/領域番号 |
19K10057
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研究機関 | 長崎大学 |
研究代表者 |
佐々木 宗輝 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 助教 (10706336)
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研究分担者 |
稲葉 菜緒 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 客員研究員 (00814170)
右藤 友督 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 助教 (10816680)
黒嶋 伸一郎 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 准教授 (40443915)
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研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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キーワード | リン / 骨細胞 / 老化 / オートファジー |
研究実績の概要 |
本研究の目的は,以下の2点である. 学術的問①:リンの血中濃度変化が骨基質のオートファジー機能に与える影響を明らかにした基礎研究は極めて少ないため不明.学術的問②:オートファジーが骨老化機構へ与える影響は全く分かっていない.従って,提起された研究課題の核心をなす学術的「問い①と②」に対する答えを見出すため,以下を本研究課題の目的とした.1)血中リン濃度の変化に対するオートファジー機能の変化を明らかにする.2)オートファジー機能に関連した骨老化経路を明らかにする.上記1)と2)を明らかにすることで,リンのオートファジー機能に対する影響が明らかになり,最終的には,オートファジー機能を介した骨老化機構が明らかになる. 平成31年度の実験では,血中リン濃度の変化がマウス長管骨におけるオートファジー関連因子の局在が変化することから,リンがオートファジーの機能的変化を惹起するものと考えられた.令和2年度では,リン濃度の変化が,老化現象に及ぼす影響について検索を行った.免疫組織化学においてリン調整食を与えた群では,老化因子の局在に変化を認め,組織形態学的解析においても変化を認めた.次に,培養骨細胞を用いて,免疫組織化学でリン濃度の変化に関連して局在が変化したオートファジー関連因子と老化因子の発現について定量解析を行った.骨組織以外の組織でも形態組織化学と免疫組織化学による解析を行った.令和3年度では,平成31年度に検索したリン濃度反応性オートファジー因子と令和2年度に検索したリン濃度反応性老化因子から変動の大きな因子を選択し,siRNAを作成して野生型マウスにトランスフェクションを行う予定であったが,siRNAの作成に時間を要した.その一方で,候補因子からKEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes) を用いてpathway検索を行った.
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
令和3年度は絞り込んだリン濃度依存性オートファジー誘発型骨老化因子の確定とメカニズム探索を目的とした.平成31年度と令和2年で絞り込んだ候補分子そのものをマウスに投与するか,siRNAを作成して野生型マウスにトランスフェクションし,候補分子を強制発現または抑制して,リン濃度依存性オートファジー誘発型骨老化因子を同定することを予定し,この際,同定分子に関連するシグナル伝達経路もウエスタンブロッティングで探索し,骨老化機構を明らかにすることを予定していた.しかし,siRNAの作成に時間を要したことから野生型マウスへの投与実験にやや遅れが生じたが,作成するsiRNAの選択は終了していることから次年度にsiRNAを作成することで当初予定していた研究を遂行できるため,今後の研究を遂行するにあたり大きな問題にはならないと考えられる.
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今後の研究の推進方策 |
令和4年度における研究の遂行は,候補因子のsiRNAを作成し野生型マウスへのトランスフェクション行い,候補因子のリンによる老化機構への影響を確認する.また,候補となった因子は,ウエスタンブロッティングにて経路検索を行う.さらに候補因子はKEGGによるpathway検索を行うを予定している.
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次年度使用額が生じた理由 |
使用額に差が生じた理由には,昨今の社会状況による学会への参加が減ったことによる,旅費と参加費の未使用が生じたためである.また研究の遂行に一部変更が生じたため次年度使用額が生じた.これは令和4年度の研究遂行に使用し,社会状況が許せば積極的に学会にも参加し情報収集と研究者との交流を行う.
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