| 研究課題/領域番号 |
19K10150
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
堀 綾花 岡山大学, 大学病院, 医員 (80828715)
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| 研究分担者 |
高柴 正悟 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 教授 (50226768)
久保田 聡 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 教授 (90221936)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 歯肉 / 線維化 / CCN2 / CCN3 / フッ素イオン |
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| 研究実績の概要 |
本研究の目的は抗う蝕作用を持つフッ素イオンが歯周組織の線維化を抑制するかを、検証することである。その第一段階として、申請時の研究計画通りにマウス線維芽細胞株NIH-3T3を用いた検討をまず行った。通常条件で培養した同細胞にフッ化ナトリウム（NaF）を添加し、抗線維化分子であるCCN3の遺伝子発現誘導が起こるか検証したところ、NAFの存在の如何にかかわらずCCN3遺伝子発現は定量限界値以下にとどまった。続いて、TGF-betaで線維化を誘導した条件でNaFの効果を検討したところ、軟骨様細胞株ではNaFによって線維化分子CCN2の遺伝子発現が抑制されたが、NIH-3T3細胞では逆に強く誘導された。なお、申請時には計画してはいなかったが、この予想外の結果を検証するために、通常条件下におけるNaFのCCN2遺伝子発現に対する影響も検討した。その結果、やはりNaFによるCCN2遺伝子の発現誘導が観察された。ところが興味深いことに、TGF-betaによる線維化誘導によって発現が上昇したI型コラーゲン遺伝子については、仮説通りにNaFによって抑制された。これらNIH-3T3による実験結果は，２つの意味で重要である。１）NaFが線維化とはI型コラーゲンの増産に他ならないので、NaFの抗線維化作用がここに立証され、本研究を発展させる根拠が得られたこと、２）NaFがCCN2産生を誘導しつつ線維化を抑制するという事実は、CCN2が線維化を引き起こすとされてきた従来の定説を覆すものであること。今後は、これらを踏まえつつ、次年度の研究に進むことになる。次の研究ステップは、ヒト歯肉線維芽細胞を用いて同様の結果が得られるかを検証する実験である。当初の計画ではヒト正常歯肉から得られた線維芽細胞をそのまま用いる予定であったが、実験系の安定性を考慮して、これを不死化した細胞株を樹立して、検討を行うことにした。幸い初年度に、この細胞の樹立は完了できている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
実験は申請時の研究計画に沿って順調に実施することができた。そしてその結果は、重要なところでは当初の仮説通りであり、研究計画の変更は必要ない。またこれと同時に予想していなかった事実が明らかになったため、当初の研究計画にはなかった実験なども行う必要が出てきた。つまり研究は予定通り進展しているだけでなく、新たな方向へも広がりを見せているため上記のように評価した。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後も申請時の研究計画に則り、不死化したヒト正常歯肉線維芽細胞を用いて、NaFの線維化抑制効果を検証から始める。なおこの細胞株の樹立と使用については「人を対象とする医学系研究に関する倫理指針」に則り、所定の手続きを経て岡山大学医療系部局生命倫理審査委員会研究倫理審査専門委員会の承認をすでに得ている。これに加えて次年度以降は、NaFがCCN2遺伝子発現に対して、軟骨細胞と線維芽細胞において逆方向の制御を行うメカニズム、およびNaFが線維芽細胞でCCN2産生を誘導しつつも、どのような分子メカニズムで線維化を抑制できるのかについても検討し、フッ素の新たな作用を探ってみたい。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
消耗品等について、予定していた額よりも僅かではあるが差額が生じたため、次年度使用額が生じたが、次年度に使用する消耗品の費用に充当する予定である。
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