| 研究課題/領域番号 |
19K10317
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| 研究機関 | 長崎大学 |
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研究代表者 |
片山 郁夫 長崎大学, 医歯薬学総合研究科(歯学系), 助教 (80295089)
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| 研究分担者 |
佛坂 由可 長崎大学, 病院(歯学系), 講師 (10244089)
佐々木 美穂 長崎大学, 病院(歯学系), 助教 (10437874)
田代 茂樹 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (20300882)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | cPLA2 / 電離放射線 |
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| 研究実績の概要 |
令和元年度は、細胞に放射線を照射した際の「細胞死シグナル」において、cPLA2がどのように関与するのかを検討した。この実験にはcPLA2WTマウスおよびcPLA2KOマウスの肺から分離したcPLA2(+/+)およびcPLA2(-/-)の線維芽細胞を使用した。
まず、cPLA2(+/+)およびcPLA2(-/-)の細胞に放射線を照射した際の細胞の生死を観察した。cPLA2(+/+)では細胞死がほとんど起こらなかったが、cPLA2(-/-)では60～80%に細胞死が起こった。このことから、cPLA2は放射線を照射した際の「細胞死シグナル」に抑制的に機能することが示唆された。
さらに、cPLA2の「細胞死シグナル」における機能を調べるために、cPLA2(+/+)の細胞に放射線照射を行い、cPLA2のリン酸化抗体を用いて、共焦点レーザー顕微鏡による免疫染色の観察を行った。その結果、放射線により活性化されたリン酸化型のcPLA2は核周辺に移行することが観察された。このことから、cPLA2は放射線によって活性化され、核周辺で機能することが示唆された。
また、放射線によるDNA損傷応答におけるcPLA2の役割を調べるために、ATMのリン酸化およびH2AXのリン酸化について検討した。その結果、放射線照射によるATMのリン酸化やH2AXのリン酸化はcPLA2(+/+)およびcPLA2(-/-)の細胞のどちらにもみられたが、cPLA2(-/-)ではcPLA2(+/+)と比較してATMのリン酸化やH2AXのリン酸化がより多く起こっていた。このことからも、cPLA2の「細胞死シグナル」における関与が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
当初の予定通り、細胞に放射線を照射した際の「細胞死シグナル」において、cPLA2が関与していることを示すことができたのでおおむね順調に進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、さらに細胞に放射線を照射した際の「細胞死シグナル」におけるcPLA2の核内での機能を明らかにするとともに、「細胞生存シグナル」へのPLA2の関与も明らかにして行きたい。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
細胞に放射線を照射した際の「細胞死シグナル」におけるcPLA2の核内での機能解析が途中までしか行えなかったため、次年度にこの実験の続きを行う予定である。
使用計画としては、「細胞死シグナル」におけるcPLA2の核内での機能解析のために使用する、細胞周期チェックポイント関連遺伝子群およびDNA修復に関わる遺伝子群の抗体の購入およびフラスコやピッペト等の消耗品の購入に充てる予定である。
さらに、これらのデータに加えて「細胞生存シグナル」におけるcPLA2の機能解析のデータが出そろった時点で学会発表を行いたい。その旅費に充てる予定である。
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