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2020 年度 実施状況報告書

次世代シークエンサーを用いた戦略的インプラント周囲炎細菌叢遷移

研究課題

研究課題/領域番号 19K10475
研究機関大阪歯科大学

研究代表者

草野 薫  大阪歯科大学, 歯学部, 准教授 (80382498)

研究分担者 山田 陽一  大阪歯科大学, 歯学部, 准教授 (20345903)
馬場 俊輔  大阪歯科大学, 歯学部, 教授 (40275227)
南部 隆之  大阪歯科大学, 歯学部, 講師 (80367903)
研究期間 (年度) 2019-04-01 – 2022-03-31
キーワード細菌叢 / インプラント周囲炎
研究実績の概要

インプラント治療の普及と超高齢社会の到来に伴い,埋入後のメンテナンス不良によってインプラント周囲炎に悩む患者が急増している.これまでインプラント周囲炎に対する様々な治療法が提案されてきたが,標準基準と呼べる治療法は未だ確立されていないばかりか,同じ治療法でも患者ごとにその効果が異なっているのが現状である.本研究は,インプラント周囲炎病巣から採取したサンプルの細菌叢を次世代シークエンサーによって解析し,臨床症状の変化と結びつけることにより,インプラント周囲炎難治化や予後を初期細菌叢から探るものである.2年目となる令和2年度は,初年度に確立した実験系をもとに,インプラント周囲炎患者からのサンプリングとその細菌叢解析を進めてきた.
(1)インプラント周囲炎患者からのサンプリングと細菌叢解析
大阪歯科大学医の倫理委員会の承認のもと,インフォームドコンセントを得たインプラント周囲炎患者10名からペーパーポイントにより歯肉縁下プラークを採取した.DNA抽出の後,16S rRNA配列をもとに次世代シークエンサーMiSeq(イルミナ社)を用いてサンプル中の細菌DNA配列を解読した.我々が構築したRスクリプトをベースにしたパイプラインにより,疾患と細菌叢との相関解析を進めているところである.
(2)細菌叢培養系の構築
上記のin vivoの解析に加え,in vitro条件での菌叢変化を解析するために,SHI培地を用いた細菌叢培養の実験系を確立しているところである.現在,インプラント周囲炎菌叢を維持しつつ培養可能な条件が明らかになりつつある.

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

多少の実験の前後はあるが,おおむね当初の計画通りに実験が進捗している.

今後の研究の推進方策

これまでの研究で得られた結果をもとに,次の研究を進める.
1.インプラント周囲炎患者からのサンプルの採取と細菌叢解析(20名の被検者選定を目指す) 2.サンプル採取した患者の症状の追跡(炎症の具合をモニターし,必要に応じて追加サンプリングを行う) 3.細菌叢のin vitro培養系を用いて,インプラント周囲炎菌叢の特徴を抽出する.

次年度使用額が生じた理由

新型コロナウイルス感染症による大学への出勤自粛,サンプリング時期の遅れにより,次世代シークエンサー(MiSeq)での解析開始が遅れたため,研究費の次年度使用が生じた.令和3年度も不透明な部分あるが,研究計画の挽回が難しい場合,研究期間の延長も検討する.

  • 研究成果

    (2件)

すべて 2020

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件、 オープンアクセス 1件)

  • [雑誌論文] Impact of short‐term saliva storage at room temperature on the microbial composition.2020

    • 著者名/発表者名
      Enomoto A, Nambu T, Kashiwagi K, Okinaga T, Baba S.
    • 雑誌名

      J Osaka Dent Univ

      巻: 54 ページ: 73-81

    • DOI

      10.18905/jodu.54.1_73

    • 査読あり
  • [雑誌論文] Inter-site and interpersonal diversity of salivary and tongue microbiomes, and the effect of oral care tablets.2020

    • 著者名/発表者名
      Maruyama H, Masago A, Nambu T, Mashimo C, Takahashi K, Okinaga T.
    • 雑誌名

      F1000Res

      巻: 9 ページ: 1477

    • DOI

      10.12688/f1000research.27502.1

    • 査読あり / オープンアクセス

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公開日: 2021-12-27  

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