• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 課題ページに戻る

2021 年度 実施状況報告書

ゲノム編集技術を用いた1,2-ジクロロプロパンの毒性機序の解明

研究課題

研究課題/領域番号 19K10589
研究機関防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究施設、病院並びに防衛

研究代表者

吉岡 範幸  防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究施設、病院並びに防衛, 衛生学公衆衛生学, 助教 (70365229)

研究期間 (年度) 2019-04-01 – 2023-03-31
キーワード1,2―ジクロロプロパン
研究実績の概要

塩素系有機溶剤である1,2―ジクロロプロパン(DCP)やジクロロメタン(DCM)が使用されていた印刷事業場の従業員に胆管がんが多発したが、ヒトにおいてみられたこの胆管がんは動物実験では再現できていない。これはヒトと動物ではこれらの有機溶剤に関する薬物代謝酵素の種類や発現量が異なることが考えられている。本研究は1,2-ジクロロプロパンの曝露により、胆管がんが発生するメカニズムを解明するために、ヒトiPS細胞由来肝細胞や株化細胞を用い、ゲノム編集技術を使ったCRISPR sgRNAライブラリーによるノックアウトスクリーニングを行い、胆管がん発生に関与する遺伝子を探索することが目的である。
2021年度は前年度検討した曝露条件に基づき、ノックアウトスクリーニングを実施した。まず、ヒトiPS細胞由来肝細胞に1,2-ジクロロプロパンを曝露した。曝露終了後その培養上清をsgRNAとCas9をトランスフェクションし作製したMMNK-1細胞の変異細胞ライブラリーに曝露させ培養した。終了後、抗γH2AX抗体を用いてDNA損傷した細胞をセルソーターにより選別した。選別した細胞、曝露条件ごとに次世代シーケンサーによる解析を行い、1,2―ジクロロプロパンと関連する遺伝子を探索した。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

実験と次世代シーケンサーによる解析は終了している。

今後の研究の推進方策

追加実験と研究成果の報告を行う。

次年度使用額が生じた理由

次年度に追加実験と研究成果報告を実施するため。

URL: 

公開日: 2022-12-28  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi