| 研究課題/領域番号 |
19K10697
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| 研究機関 | 神戸薬科大学 |
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研究代表者 |
森田 いずみ 神戸薬科大学, 薬学部, 講師 (20299085)
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| 研究分担者 |
小林 典裕 神戸薬科大学, 薬学部, 教授 (90205477)
大山 浩之 神戸薬科大学, 薬学部, 准教授 (80572966)
上田 宏 東京工業大学, 科学技術創成研究院, 教授 (60232758)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 抗体 / シロシン / シロシビン |
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| 研究実績の概要 |
幻覚性キノコの薬理成分であるシロシビンに対して、簡便・迅速な測定を可能にするオンサイト免疫測定法を構築すべく、抗シロシビン一本鎖Fvフラグメント（scFv）を用いて、クエンチ抗体（Q-body）の創製を試みた。Q-bodyは、scFvのN末端近傍を部位特異的に蛍光標識したもので、「蛍光センサー」として働く。昨年度得られた野生型抗シロシビンscFv（#WT）および変異抗シロシビンscFv（#107）について、それぞれの野生型、さらにクエンチ（消光）の増強が期待される32番目あるいは91番目のチロシンをトリプトファンに置換した（Y32W、Y91W）およびその両者の置換体（2mut）、計8種のQ-bodyを作製した。これらについて評価を行ったところ、Q-body#WT-Y32Wがシロシビンに対して、最も高感度な応答を示し、シロシビン0.1～20 μg添加で、用量依存的にQ-body由来の蛍光強度の増大が確認された。しかしながら、現在のところその測定値の再現性に問題があり、諸条件などを検討中である。このQ-body#WT-Y32Wについて、BLI法によりセンサーチップ上のシロシビン基に対するKa値を求めたところ、5.7×E+7 1/Mと算出された。さらに、幻覚性キノコ及び食用キノコ（シイタケ、きくらげ、マイタケ、マッシュルーム、なめこ）のメタノール抽出エキスについても検討を行った。その結果、シロシビンを含む幻覚性キノコの抽出エキスにおいては、Q-body由来の蛍光が観察され、シイタケ、キクラゲの抽出エキスでは、Q-body由来の蛍光は観察されなかった。しかし、マイタケ、マッシュルーム、なめこの抽出エキスでは、蛍光が観察され、夾雑物による交差反応が認められた。以上より、今回作製したQ-bodyについて、親和力や特異性のさらなる改善が必要である。
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