| 研究課題/領域番号 |
19K11680
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| 研究機関 | 近畿大学 |
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研究代表者 |
福嶋 伸之 近畿大学, 理工学部, 准教授 (10254161)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | オレイン酸 / CD36 / 細胞周期 / CDK |
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| 研究実績の概要 |
脂肪酸は、細胞膜構成成分や生体のエネルギー源として働いている。近年、細胞膜上に脂肪酸の受容体（FFAR1ー4）や輸送体（CD36など）が存在すること、脂肪酸により特異的な細胞応答が生じることなどが報告され、脂肪酸がシグナル分子として細胞の機能を調節していることが示されるようになってきた。われわれは、オリーブ油に豊富なオレイン酸（OA）がHNOA卵巣がん細胞の生存促進を示すことを見出した。本年度は主にOAによる細胞周期駆動（S期細胞およびM期細胞の増加）のメカニズムを調べた。
HNOA細胞をOAで処理すると、サイクリン依存性キナーゼ（CDK）7、CDK1/2のリン酸化が見られた。また、これら阻害剤によりOAの細胞周期駆動は抑制された。さらに、OAによる細胞周期駆動およびCDK7、CDK1/2のリン酸化は、Srcファミリーチロシンキナーゼの阻害剤によっても抑制された。
CD36の関与を調べた。CD36阻害剤のSSOを用いたところ、OAによる細胞周期駆動はSSOにより完全に阻害された。また、OAによるCDK7、CDK1/2のリン酸化も抑制された。これらに続いて、ゲノム編集によるノックアウト細胞の作成を試みているが、現状ではクローニングに成功していない。このため、shRNAによるCD36ノックダウン細胞を作成し、予備実験を実施したところ、OAによる細胞増殖が抑制されることを見出した。
GLUT1、3、4のプロモーター活性を測定するためのアッセイ系を作成した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
CD36ノックアウト細胞の作成、チロシンリン酸化のメカニズム解析がやや遅れている。これは、ゲノム編集の効率が想定よりも低いことが原因であり、今後使用プラスミドの変更などを考える。チロシンリン酸化の解析では、全リン酸化タンパク質の解析を実施しているが、感度が低い痛目に特異的な分子が見出せていない。今後，Phos-tagなどに使用ツールを変更して解析を継続する。
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| 今後の研究の推進方策 |
ゲノム編集ツール，リン酸化タンパク解析ツールの変更などにより、検討を継続していく。一方、GLUT転写調節機構については、レポーターアッセイ用ツールが作成されたため，これらを使用して、当初計画に従って解析を推進する。モデルマウスの作成は、ノックアウト細胞が作成され、解析が終了次第実施していく。ただし、これについては3年目を予定している。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
ゲノム編集やチロシンリン酸化解析に必要なツールの最適な選択に時間がかかり、当該年度では購入に至らなかった。今後は、複数の候補ツールを並行して検討するために、当該助成金を使用する。
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