| 研究課題/領域番号 |
19K11791
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| 研究機関 | 岡山大学 |
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研究代表者 |
稲垣 純子 岡山大学, 医歯薬学総合研究科, 助教 (90271056)
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| 研究分担者 |
渡辺 彰吾 岡山大学, 保健学研究科, 准教授 (20548341)
廣畑 聡 岡山大学, 保健学研究科, 教授 (90332791)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | NASH / 線維化 / 炎症性細胞 / CCR2陽性細胞 / 筋線維芽細胞 / オステオポンチン |
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| 研究実績の概要 |
非アルコール性脂肪肝炎（NASH）は、肝硬変・肝がんといった重篤な疾患へと進展する難治性疾患で、肝線維化進展等の病態メカニズムの解明と治療法の開発が急がれている。そこで本研究では、組織マクロファージであるKupffer細胞や肝星細胞などの活性化・分化誘導、骨髄からの炎症性CCR2陽性マクロファージの肝臓への誘引・浸潤・蓄積について、特に、CCR2陽性細胞と、サイトカインとして肝壊死・線維化に重要な役割を有しているとされる炎症性細胞外マトリックスタンパク質のオステオポンチン (OPN) に注目して、肝線維化の分子制御機構を明らかにすることを目的とした。SHRSP5/Dmcrラットは、高脂肪高コレステロール (HFC)食を投与することで顕著なNASH病態に加え炎症細胞の著明な浸潤などの特徴を持つ。今回、HFC食負荷6週あるいは8週のSHRSP5/Dmcrラット肝臓組織を用いて、線維化進展に伴うOPNの発現量や発現領域について免疫染色により比較検討した。HFC食負荷8週では6週に比べ著しく線維化が進展しており、それに伴ってOPNの発現量や発現領域も増大、拡大していた。線維化進展に伴いOPNの線維化領域における発現の亢進とともにCD68陽性細胞やαSMA陽性細胞数も顕著な増加が見られ、蛍光二重染色においてOPNの局在は、CD68陽性炎症細胞およびαSMA陽性筋線維芽細胞近傍領域に確認できた。特に、OPN産生細胞の周囲には、取り囲むようにαSMA陽性筋線維芽細胞が集積し、網目構造を構成していた。OPN産生細胞の中にはCD68陽性の細胞も観察され、さらにCCR2発現細胞（骨髄由来の浸潤性CCR2陽性マクロファージ）とOPNの局在の検討から、骨髄由来浸潤性CCR2マクロファージが、このNASHラットモデルにおいて、OPNを産生している1つの細胞の可能性が示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
NASH病態を示すHFC食投与SHRSP5/Dmcrラットの肝臓組織は、本研究の分担者である渡辺より随時得ることができるため、免疫組織染色法による解析はおおむね順調に進んでいる。
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| 今後の研究の推進方策 |
昨年度に引続き、NASHモデルとしてHFC食を投与したSHRSP5/Dmcrラット肝臓組織を用い、CCR2陽性細胞とOPNの肝壊死・肝線維化への関与について検討する。
1. 線維化部位に集積するOPN発現細胞をマクロファージやTリンパ球のマーカーを用いて蛍光二重免疫組織染色法にて解析し、発現細胞を同定する。
2. OPNのNASH病態への役割、特に、肝壊死・肝線維化における機能を明確にするため、昨年度に引き続き、経時的に（2, 4 週間）HFC食を投与したSHRSP5/Dmcrラッ肝臓組織を用いて、OPNの発現量の変化および局在について検討する。また、CCR2陽性OPN発現細胞と線維化の程度を比較検討する。
3. 我々のグループでは、HFC食負荷8週後に、通常食を2週間投与するとNASH様病態（肝線維化）が改善すると言った実験結果を得ている。この改善の見られたラット肝臓組織におけるOPNの発現量や局在、線維化、および組織病理学的解析よりCCR2陽性細胞の肝臓への浸潤・蓄積の程度を比較する。また、脂肪食摂取を抑制することで肝線維化の改善効果が見られる理由として、OPN発現抑制ばかりでなく、コラーゲン分解酵素であるMMPなどの観点からその発現および分解酵素活性についても検討する。
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