| 研究課題/領域番号 |
19K15720
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| 研究機関 | 国立研究開発法人産業技術総合研究所 |
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研究代表者 |
古旗 祐一 国立研究開発法人産業技術総合研究所, 生命工学領域, 研究員 (40828026)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | 蛍光RNA / SELEX / アプタマー / ライブイメージング |
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| 研究実績の概要 |
多くの生命現象はRNAを介して動的に制御されており，RNAの細胞内局在及び発現量解析は高次生命現象を紐解く鍵となっている．近年開発された蛍光団と複合体を形成することで蛍光能を獲得する蛍光RNAは，RNA解析を実施する上で強力なツールとなり得るが，現在の蛍光RNAプローブは蛍光強度と持続性が低く，内在RNAのイメージングへの適用が難しいことが問題となっていた．こうした背景のもと本研究では，申請者が独自に開発した高輝度蛍光RNAをベースとして，内在遺伝子に蛍光RNA配列を付加することでRNAの継続的なライブイメージングを可能とする超高輝度蛍光RNAを作出することを目的とし，研究を推進している．
初年度は上述の蛍光RNAを効率的にセレクションするための実験系の構築を行った．第一に，ランダム変異ライブラリから蛍光団と強く相互作用する配列を一次セレクションするために，モデル低分子を用いて試験管内における核酸配列の分子進化系（SELEX）の構築を行った．第二に，一次セレクション産物をヒト細胞内に発現させるための，蛍光RNAの足場となるRNA種の検討や核酸導入条件の検討を行った．第三に，本細胞を蛍光強度依存的にセレクションするためのフローサイトメトリー系を構築した．第四に，セレクションした核酸配列ライブラリからより高性能な蛍光RNAを抽出するための次世代シーケンサーを用いた配列解析系の検討を実施した．
こうしたことから，当該年度は実施計画をおおむね順調に進行したと言える．
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
初年度は目的とするRNAをセレクションするために必要なSELEX，細胞導入，フローサイトメトリー，次世代シーケンスなどの主要な実験系の立ち上げに従事した．年度内までに目的RNAの獲得は出来なかったものの，準備は整ったため，おおむね順調に進展していると言える．
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| 今後の研究の推進方策 |
初年度までに必要な実験系の構築を終えたため，今後は目的とする超高輝度蛍光RNAのセレクションとin vitro，in vivoにおける性状解析を実施する予定である．
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| 次年度使用額が生じた理由 |
当初購入を予定していた，変異ライブラリ調製試薬の購入費が少なく済んだため．また社会の状況を鑑みて学会参加を見送ったため．
次年度は当初の予定通りライブラリの構築及び可能であれば学会参加等の旅費として使用する．
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