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2022 年度 実績報告書

m7GTP capを介した新規翻訳制御機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号 19K16516
研究機関名古屋大学

研究代表者

浜口 知成  名古屋大学, 医学系研究科, 特任助教 (90812149)

研究期間 (年度) 2019-04-01 – 2023-03-31
キーワードm7GTP cap / ヒ素 / GEMIN body
研究実績の概要

mRNAの5'末端にあるm7GTP capは、翻訳や輸送といったmRNA代謝に必須な化学修飾構造である。ヒ素による酸化ストレス下でのm7GTP capの役割は全く知られていない。ヒ素濃度依存性にm7GTPと結合するタンパク質としてGEMIN4を同定した。最新のRNA-タンパク質相互作用解析法を用いて、GEMIN4の生体内結合RNAの次世代シークエンス解析を行ったところ、ヒ素濃度依存性にリボソームタンパク質遺伝子を中心とする数千を超える遺伝子mRNAのm7GTP capに結合していた。また、rRNAにも結合していた。ヒ素刺激によりm7GTP capped mRNAは内在性GEMIN4と共沈した。Methyl methansulfonate刺激にも同様の結果を得た。過酸化水素水刺激による変化は乏しかった。レポーターアッセイでは、GEMIN4がヒ素濃度依存的に翻訳を抑制した。pulsed SILAC法(Stable Isotope Labeling using Amino acids in Cell culture)を用いて、GEMIN4が酸化ストレス依存的にリボソームタンパク質等の翻訳を抑制することが判明した。しかし、共同研究協力のもとRibosomal profilingを実施したが、翻訳抑制を支持するデータが得られなかった。m7GTPとGEMIN4の結合にメチル化修飾が関与していることが、阻害剤を使った結合実験から明らかになった。免疫染色を行ったところ、GEMIN4は定常状態では細胞質に存在し、酸化ストレス刺激に伴い細胞質に凝集していく形態変化を認めた。しかし、これはストレス顆粒とは共局在しない。総じて、薬剤によるメチル化修飾によってm7GTPとGEMIN4が結合が明らかとなったが、その生物学的意味は未解明である。

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公開日: 2023-12-25  

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