| 研究課題/領域番号 |
19K16918
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| 研究機関 | 九州大学 |
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研究代表者 |
中嶋 秀行 九州大学, 医学研究院, 助教 (00835390)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | MeCP2 / RTT / ミクログリア / TLR9 |
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| 研究実績の概要 |
MECP2遺伝子変異は、Rett症候群（RTT）をはじめ、自閉症、統合失調症などを含めた様々な精神疾患・発達障害への関与が知られているが、その発症機序の詳細は不明である。申請者はこれまでに、脳内免疫担当細胞ミクログリアに高発現し、細菌・ウイルス由来DNAを認識するToll様受容体9（TLR9）の遺伝子欠損マウスとMeCP2遺伝子欠損マウスを交配させ得られたTLR9/MeCP2ダブル欠損マウスでは、MeCP2単独欠損マウスと比べミクログリアの活性化が抑制され、寿命が著しく伸びることを発見した。そこで本研究では、遺伝子欠損マウスの表現型の回復評価を行った。まず、TLR9/MeCP2ダブル欠損マウスにおいてオープンフィールドテストを行った。その結果、MeCP2欠損マウスと比較しTLR9/MeCP2ダブル欠損マウスでは活動量が増加していることが明らかとなった。次に、ミクログリア機能性分子の同定を行うため、野生型、MeCP2欠損マウス及びTLR9/MeCP2ダブル欠損マウスとIba1-GFPマウスとの交配を行った。この交配により得られたマウスから脳を単離し、GFPの蛍光を指標に蛍光細胞分取装置により各遺伝子欠損ミクログリアを単離した。その後、RNAを抽出しライブラリーを作製した。また、TLR9のリガンドと想定している物質Xの阻害剤をMeCP2欠損マウスに投与したところ、MeCP2欠損マウスでみられるRTT様の表現型の改善及び寿命の延伸が観察された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
本年度は予定していたTLR9/MeCP2ダブル欠損マウスを用いたオープンフィールドテストを行うことができたが、恐怖条件付けテスト（文脈記憶・注意能力を測定）は行うことができなかった。ミクログリア機能性分子の同定を行うための実験ではライブラリーの作製までは行うことができたが、その後の機能性分子の同定までには至っていない。予定していた阻害剤投与実験に関しては概ね順調に進んでいる。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、TLR9/MeCP2ダブル欠損マウスを用いた恐怖条件付けテストを行う。また、ミクログリア機能性分子の同定を行う。ライブラリーの作製までは行うことができたので、今後はRNA-シーケンスを行い遺伝子の発現変動をゲノムワイドに解析する。野生型と比較し、MeCP2欠損ミクログリアで発現が変化しており、かつTLR9/MeCP2ダブル欠損ミクログリアで発現が正常に戻っている遺伝子をミクログリア機能性候補分子として同定する。阻害剤の投与実験に関しては引き続き行動解析実験を行う。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
MeCP2欠損マウスとTLR9欠損マウスとの交配が上手くいかず、必要数の遺伝子欠損マウスを得ることができなかった。そのため予定していた実験を行うことができなかった。また、COVID-19の影響で参加した学会がすべてリモート開催となり旅費の支払いが無くなったため。
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