| 研究課題/領域番号 |
19K16992
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| 研究機関 | 昭和大学 |
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研究代表者 |
小池 佑果 昭和大学, 薬学部, 助教 (10644479)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | お血 / 漢方 / 血液凝固 / 血小板凝集 / トロンビン活性 |
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| 研究実績の概要 |
本研究は東洋医学で基本概念の1つである「お血」に着目した研究である。 お血は微小循環障害や血行障害に近いと考えられており、お血の症状は血液粘度上昇や血小板凝集増進が報告されている。本研究はお血治療薬の作用機序解明と新たなお血治療薬を提案する事を目的としている。昨年度は、お血治療薬が作用する血液粘度因子と血小板凝集に関わる因子を特定する為、以下の試験を行なった。
お血の治療に用いられる漢方10種（当帰芍薬散、大黄牡丹皮湯、加味逍遙散、温経湯、通導散、女神散、当帰四逆加呉茱萸生姜湯、摂衝飲、キュウ帰調血飲、治打撲一方）を熱水抽出し、凍結乾燥しエキス粉末を作成した。血液凝固系に及ぼす影響の検討は、10種類の漢方エキスについてAPTT、PTを測定した。大黄牡丹皮湯、加味逍遙散、温経湯、通導散、女神散、当帰四逆加呉茱萸生姜湯、摂衝飲、キュウ帰調血飲、治打撲一方の9種類がAPTT、PTを延長した。更に、これら9種の漢方がトロンビン活性を阻害する事を明らかにした。本年度は、9種の漢方エキスのうち最も強いトロンビン活性阻害を示した治打撲一方エキスに含まれる活性成分を2つ単離しその構造を同定した。更に、これらの化合物についても濃度依存的にトロンビン活性を阻害することが明らかとなった。また、2つの活性成分が含まれる植物及び生薬を薬用植物総合データベースや最新の論文を検索し、緩下作用を主作用とする植物から単離報告があったので、その植物の抽出物を作成しトロンビン活性について検討を行っている。次に10種の漢方の血小板凝集能を測定した結果、当帰芍薬散、大黄牡丹皮湯、加味逍遙散、温経湯、通導散、女神散、当帰四逆加呉茱萸生姜湯、摂衝飲、治打撲一方1mg/mL で凝集抑制が認められた。凝集抑制が認められたことから、血管内皮細胞を用いて血小板凝集に関わる因子の発現や産生について検討している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
2019から2020年の2年間は既存治療薬の作用ポイントを特定する事を目標としていた。具体的には、血液凝固系で①APTT、PT測定、②トロンビン活性試験、③第Ⅹ因子活性試験。血液線溶系で④フィブリン平板法、⑤プラスミン活性試験、⑥ウロキナーゼ活性試験。血小板凝集能で⑦血小板凝集能試験、⑧血小板の活性試験、⑨フォンウィルブラント因子（vWF）活性試験を予定していた。
2019年度は、血液凝固系の①APTT、PT測定、②トロンビン活性試験、血液線溶系の④フィブリン平板法、血小板凝集能の⑦血小板凝集能試験を行った。更に、APTT、PT試験で凝固時間を延長しトロンビン活性試験で強い阻害活性を示した治打撲一方エキスについて分配と分画を行い、2つの活性成分を単離した。 2020年度は、単離した2つの活性成分の構造を同定し、2つの活性成分が濃度依存的にトロンビン活性を阻害することを確認した。更に薬用植物総合データベースや最新の論文を検索し、お血治療に使われない植物から活性成分の単離報告があったことから、その抽出物を作成しトロンビン活性を検討している。更に、新型コロナウィルスの影響により、2019年度に予定していた試験が行えなかった為、今年度は血管内皮細胞を用いて⑧血小板の活性試験、⑨フォンウィルブラント因子（vWF）活性試験の実験系の立ち上げを行い、また来年度実施予定の動物実験の準備を行った。
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| 今後の研究の推進方策 |
2021年度は、2019年度にAPTT、PT延長を示した漢方エキス（大黄牡丹皮湯、加味逍遙散、温経湯、通導散、女神散、当帰四逆加呉茱萸生姜湯、摂衝飲、キュウ帰調血飲、治打撲一方）について血液凝固系の③第Ⅹ因子活性試験をする。また、血小板凝集能を抑制した漢方エキス（当帰芍薬散、大黄牡丹皮湯、加味逍遙散、温経湯、通導散、女神散、当帰四逆加呉茱萸生姜湯、摂衝飲、治打撲一方）について血小板凝集能の⑧血小板の活性試験、⑨フォンウィルブラント因子活性試験をする。2019年度の結果と合わせて、既存お血治療薬の作用ポイントを特定する。更に、お血モデルマウスを使った新規お血治療薬候補の効果を検討する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
コロナの影響により2019から2020年度に予定していた試験を中止した為、残高が生じた。コロナの感染状況を見ながら、当初予定していた試験と次年度予定している試験を並行して進める。
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