| 研究課題/領域番号 |
19K17187
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| 研究機関 | 岐阜医療科学大学 |
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研究代表者 |
小縣 綾 岐阜医療科学大学, 薬学部, 助教 (10805857)
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| 研究期間 (年度) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| キーワード | TLR4 / PETイメージング / 短寿命放射性核種 / 炎症 |
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| 研究実績の概要 |
神経炎症を標的とした新規リガンドの臨床応用を目指し、脳内においてミクログリアやアストロサイトに発現し、炎症において重要な因子のひとつであるTLR4を標的とする18F標識PETリガンドを開発する。本研究では、TLR4を標的とした18F標識PETリガンドの合成及び小動物における有効性を明らかにすることを目的としている。
TLR4は脳内では主にミクログリアやアストロサイト細胞膜表面に発現し、LPSなどが結合することで活性化され、TNF-αやIL-6、IL-1βなどの炎症性サイトカインを産生し、炎症反応を惹起するとされている。実験的には加齢マウスにおいて、ミクログリア細胞膜上のTLR4にリガンドが結合すると、ミクログリアが活性化されてアミロイドβが減少することが報告されている。加えて、アルツハイマー病患者において、TLR4の脳内発現量が増加することも報告されている。これらの報告から、TLR4の脳内密度や分布などの情報が得られるバイオマーカーとなるPETリガンドの開発は、神経変性疾患における治療法の開発に役立つことが期待される。
本研究では、脳梗塞モデルマウスにおいて薬効が報告されているDNAアプタマーを18F標識PETリガンド化する。しかし、このDNAアプタマーは脳内移行性が明確には示されていないため、蛍光標識DNAアプタマーを健常マウスに投与し脳内移行性を検証した。その結果、脳移行性を確認することはできたが、今回のDNAアプタマーは鎖長が長く、熱的安定性も高いため、18F標識化後に放射性薬剤として分離精製することが困難であることが示唆された。
以上から、より分子量が小さく標識化後にHPLCによって分離精製することも可能と考えられるTLR4阻害剤として、DNAアプタマーと同じ標識化方法が転用できるペプチド分子(分子量2500程度)をPETリガンドとして検討する。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本年度は、炎症モデルラットを作成し、TLR４の脳内発現をウエスタンブロット及び免疫染色で評価・定量を実施した。TLR4の脳内発現や分布を確認することができた。
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| 今後の研究の推進方策 |
TLR4と結合する分子をDNAアプタマーからペプチド分子に変更する。しかし、放射性標識化の方法に大きな差異はなく、標識前駆体とペプチド分子のクリック反応による結合及び標識化合成を実施する予定である。その後、小動物においてTLR4のイメージングリガンドとしての有効性評価を実施する。
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| 次年度使用額が生じた理由 |
PET撮像をはじめとする動物評価を実施することができなかったため次年度使用額が発生した。今年度、標識化合成やそれに伴う動物評価を実施するため、その合成試薬及び動物購入等の物品費として使用する。
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