特定部位へのDSB誘導系を用いた染色体転座優先機構の解明

2019 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 19K17275
• 研究機関: 福島県立医科大学
• 研究代表者: 阿部 悠 福島県立医科大学, 医学部, 助教 (00722472)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: 染色体異常 / DSB誘導モデル

研究実績の概要

今年度の目標として掲げていたDox誘導CRISPR/Cas9システムによるDSB誘導細胞株の作製については、以前樹立したCRISPR/Cas9によるIgHおよびCCND1遺伝子の切断によるt(11;14) の人工的転座誘導の系を用いて、任意のタイミングで誘導可能なTet-Off 誘導系に改変し293 細胞やhTERT 不死化繊維芽細胞などのAAVS1座位に組み込んでDSBを誘導し、転座/二動原体染色体(Dic)の生成頻度についてPCRおよび蛍光タンパクによる迅速解析系を作製した。転座/Dicの形成に応じて発現する蛍光タンパクを検出する系としてCas9による切断および蛍光タンパク(GFPおよびRFP)の導入実験が完了し、現在は蛍光タンパクの発現の有無とその蛍光強度について確認を進めている。
また、染色体異常頻度の形成頻度の差異および個人間での染色体異常形成率に差があるか調べるため、CT被ばく患者の検体を用いて解析を進める予定であったが、染色体異常頻度の観察に、これまでのCT検査による被ばくによってバイアスが生じている可能性が考えられたため、幅広い年齢層での解析および年齢や喫煙など染色体異常頻度に影響を及ぼす可能性が考えられる要素について出来る限り排除するため、新たに複数名の健常者から採血を行い、末梢血リンパ球に1Gy以下 (0, 0.2, 1Gy) のX線照射を行い、Dicおよび転座の形成頻度についてギムザ染色およびFISH法にて解析を進めている。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

概ね当初の計画通りの進行である。

今後の研究の推進方策

作成したDSB誘導細胞株を用いてshRNAなどの阻害分子による染色体異常頻度への影響について解析を進めていく所存である。

次年度使用額が生じた理由

異なる補助事業費から国内旅費の補填が行えたため、次年度使用額が生じた。これについては、来年度の物品費として充当、使用する予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Induction of t(11;14) IgH enhancer/promoter?cyclin D1 gene translocation using CRISPR/Cas9 (2019)
  • 著者名/発表者名: Tsuyama Naohiro、Abe Yu、Yanagi Aki、Yanai Yukari、Sugai Misaki、Katafuchi Atsushi、Kawamura Fumihiko、Kamiya Kenji、Sakai Akira
  • 雑誌名: Oncology Letters 巻: 18 ページ: 275-282
  • DOI: 10.3892/ol.2019.10303
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Investigation of the cumulative number of chromosome aberrations induced by three consecutive CT examinations in eight patients (2019)
  • 著者名/発表者名: Abe Yu、Noji Hideyoshi、Miura Tomisato、Sugai Misaki、Kurosu Yumiko、Ujiie Risa、Tsuyama Naohiro、Yanagi Aki、Yanai Yukari、Ohba Takashi、Ishikawa Tetsuo、Kamiya Kenji、Yoshida Mitsuaki A、Sakai Akia
  • 雑誌名: Journal of Radiation Research 巻: 60 ページ: 729-739
  • DOI: 10.1093/jrr/rrz068
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Construction of fluorescence in situ hybridization (FISH) translocation dose-response calibration curve with multiple donor data sets using R, based on ISO 20046:2019 recommendations (2019)
  • 著者名/発表者名: Goh Valerie Swee Ting、Fujishima Yohei、Abe Yu、Sakai Akira、Yoshida Mitsuaki A.、Ariyoshi Kentaro、Kasai Kosuke、Wilkins Ruth C.、Blakely William F.、Miura Tomisato
  • 雑誌名: International Journal of Radiation Biology 巻: 95 ページ: 1668～1684
  • DOI: 10.1080/09553002.2019.1664788
  • 査読あり
• [学会発表] Present issues of dose evaluation following low-dose ionizing radiation exposure by analyzing chromosome aberrations (2019)
  • 著者名/発表者名: Yu Abe, Hideyoshi Noji, Tomisato Miura, Kurumi Fujioka, Misaki Sugai, Yumiko Kurosu, Risa Ujiie, Naohiro Tsuyama, Aki Yanagi, Yukari Yanai, Takashi Ohba, Tetsuo Ishikawa, Toshiya Inaba, Kenji Kamiya, Mitsuaki A. Yoshida, Akira Sakai.
  • 学会等名: IAEA Techical Meeting for NA9_39 Project
  • 招待講演
• [学会発表] Difficulty in dose evaluation following low-dose ionizing radiation exposure by analyzing chromosome aberrations (2019)
  • 著者名/発表者名: Abe Y, Noji H, Miura T, Fujioka K, Sugai M, Kurosu Y, Ujiie R, Tsuyama N, Yanagi A, Yanai Y, Ohba T, Ishikawa T, Inaba T, Kamiya K, Yoshida MA, Sakai A.
  • 学会等名: The International Symposium on Chromosomal Aberrations (ISCA) 12 in ICRR 2019
  • 国際学会
• [学会発表] Automation of chromosome analysis process and improvement of analysis efficiency with chromosome aberration analysis software (2019)
  • 著者名/発表者名: Abe Y, Miura T, Yoshida MA, Liu M, Zheng B, Ishiwata K, Sugai M, Tsuyama N, Yanagi A, Kamiya K, Sakai A.
  • 学会等名: 第62回日本放射線影響学会
• [学会発表] Analyses of sequence-specific DNA double-strand breaks and chromosomal aberrations using CRISPR/Cas9. (2019)
  • 著者名/発表者名: Tsuyama N, Abe Y, Yanagi A, Sugai M, Kamiya K, Sakai A.
  • 学会等名: 第62回日本放射線影響学会