|
2021年度も母体へのベタメタゾン投与から分娩までの間隔や、追加投与の有無と動脈管閉鎖の関連を検討する予定としていたが、2020年度 に引き続き酸素分圧変化の影響を検討する方針とした。所属研究室の先行研究により、出生によって生じる酸素分圧変化が活性酸素の上昇から最終的にbFGFの増加をもたらすことで動脈管閉鎖に影響を与えていることは証明されてきていた。そのため、2019年度同様、胎齢21のラット胎仔から初代培養を行って得た動脈管平滑筋細胞・大動脈平滑筋細胞を用いて、各々の細胞における酸素分圧上昇による活性酸素量の変化を検討した。2019年度に動脈管平滑筋細胞を低酸素状態(酸素濃度 3%)から大気下(酸素濃度 21%)に移すことで活性酸素の指標であるROS活性が上昇し、大動脈平滑筋細胞ではその変化が生じないことを確認していたが、値の変動が大きく信頼性に不安が残る結果となっていた。このため2021年度では、初代培養後に安定した細胞接着と増殖が確認できた後に直ちに低酸素状態での培養を開始し、クリーンベンチでの各種操作もすべて低酸素状態を保つようにした。さらに3継代までの細胞を使用し、ROS産生はDCF-DA試薬を用いることでROS産生を再現性良く検出することができた。一方で動脈管平滑筋細胞は大動脈平滑筋細胞に比べて増殖速度が遅く、ROS産生はウェルごとのタンパク量で補正する必要があることが明らかとなった。これらの検討から、動脈管平滑筋細胞では大動脈平滑筋細胞に比べて低酸素から大気下環境に変化させたときのROS産生が多いことが示唆された。さらに、その差は少なくとも数時間以上続くことが示された。
|
