肝硬変、NASH発症・進展に果たす造血細胞の関与の解明と新たな治療標的の確立

2019 年度 実施状況報告書

• 研究課題/領域番号: 19K17404
• 研究機関: 宮崎大学
• 研究代表者: 大園 芳範 宮崎大学, 医学部, 医員 (20839394)
• 研究期間 (年度): 2019-04-01 – 2022-03-31
• キーワード: fibrocyte / clodronate liposome / CD11b-DTR / TET2

研究実績の概要

テーマ①肝線維化におけるfibrocyteの寄与の検討
Clodronate liposome (CL) 静注およびCD11bのプロモーター下にdiphtheria toxin receptor (DTR)を発現するCD11b-DTRマウスへのDT投与による単球除去系を確立した。また、野生型マウスに四塩化炭素 (CCl4: carbon tetrachloride) 投与、あるいはコリン欠乏高脂肪食飼料 (CDAHFD: choline-deficient, L-amino acid-defined, high-fat diet) の給餌により肝線維化モデルが作成できることを確認した。
CCl4投与マウスにCLを併用投与したところCL非投与群と比較して肝臓中のfibrocyteは減少したが、肝線維化の進展は抑制されなかった。CCl4により誘導された肝線維化モデルにおいては肝線維化におけるfibrocyteの寄与は小さいと考えられた。この成果を論文にして発表した。

テーマ②TET2 KOマウスによる血液細胞の機能解析
TET2 KOマウスの骨髄を野生型マウスに移植し、移植後からCDAHFDを給餌し、12週後に解剖して肝臓の病理標本を作製した。HE染色で脂肪肝および炎症細胞浸潤、Azan染色で肝線維化が確認されたが、野生型マウスの骨髄を移植したコントロール群と比較して、脂肪肝および肝線維化の程度には差がみられなかった。

現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

テーマ①肝線維化におけるfibrocyteの寄与の検討
単球除去系と肝線維化モデル作成が確立できた。CCl4投与マウスにCLを併用投与した。四塩化炭素による肝線維化モデルでは肝線維化進展におけるfibrocyteの寄与は小さいことを示し、その成果を論文化した。

テーマ②TET2 KOマウスによる血液細胞の機能解析
TET2 KOマウスの骨髄を野生型マウスに移植し、移植後からCDAHFDを給餌し、野生型マウスの骨髄を移植したコントロール群と比較した。造血細胞におけるTET2欠損は、脂肪肝および肝線維化の程度に影響を与えないことを明らかにした。

今後の研究の推進方策

テーマ①肝線維化におけるfibrocyteの寄与の検討
CD11b-DTRマウスの骨髄を移植した野生型マウスにCDAHFDを給餌して非アルコール性脂肪肝炎モデルマウスを作成し、DTを投与することで肝臓中のfibrocyteが減少するか、また脂肪肝や肝線維化の進展が抑制できるかを比較検討する予定である。

テーマ②TET2 KOマウスによる血液細胞の機能解析
TET2 KOマウスの骨髄を移植したマウスと、野生型マウスの骨髄を移植したマウスの間で脂肪肝および肝線維化の程度に差異が認められなかったため、本テーマは終了とする。

研究成果

• [雑誌論文] Monocyte-derived Fibrocytes Elimination Had Little Contribution on Liver Fibrosis (2019)
  • 著者名/発表者名: Yoshinori Ozono, Kotaro Shide, Fumiyo Toyoshima, Yuuka Takaishi, Mai Tsuchimochi, Ayako Kamiunten, Takuro Kameda, Kenichi Nakamura, Tadashi Miike, Kazunori Kusumoto, Hisayoshi Iwakiri, Satoru Hasuike, Kenji Nagata, Akira Sawaguchi, Kazuya Shimoda
  • 雑誌名: Hepatobiliary & Pancreatic Diseases International 巻: 18 ページ: 348-353
  • DOI: 10.1016/j.hbpd.2019.02.002.
  • 査読あり
• [学会発表] Depletion of Neoplastic CD11b Positive Cells in Jak2V617F Mutant Mice Reduced Fibrocytes in Bone Marrow and Improved Myelofibrosis (2019)
  • 著者名/発表者名: Kazuya Shimoda
  • 学会等名: 2019 ASH Annual Meeting
  • 国際学会