2019 年度実施状況報告書

低酸素誘導因子 (HIF)-1αの新規経路に着目した進行胃がん治療戦略の開発

研究課題

研究課題/領域番号	19K17439
研究機関	札幌医科大学
研究代表者	大須賀崇裕札幌医科大学, 医学部, 助教 (40619714)
研究期間 (年度)	2019-04-01 – 2021-03-31
キーワード	胃癌
研究実績の概要	本年度の研究の実績としては, 胃癌細胞株を低酸素で培養できる環境を当科研究室で準備することができた。低酸素培養用の専用のチャンバーと酸素濃度計の導入により実際に, 低酸素で培養ができていることを確かめ, ウエスタンブロットでもHIF-1αが発現する条件を確かめることが可能となった. 低酸素培養環境が確立したので, 今後はHIF-1α高発現条件で, ANKRD37やRELといった想定される経路の遺伝子の発現状況についてウエスタンブロットやRT-PCRなどを用いて確認していく. さらにHIF-1α、ANKRD37、RELといった遺伝子のWT/KO細胞株における低酸素条件での細胞増殖の差について比較検討していく. RT-PCRやウエスタンブロット等の各実験条件のより適切な設定についても検討を進めている. RELの阻害剤はペントキシフィリンやIT-901が報告されており、その投与が増殖と関連するかどうかについても検討中である. また, 組織でのHIF-1α等遺伝子の発現の検討では, IRB承認後に, 病歴から喫煙歴により喫煙者と非喫煙者に分類した上で後ろ向きに既報に準じて組織免疫染色強度にてHIF-1α発現の差異等について検討を行う. 動物実験申請の承認後には, 胃癌細胞株をマウスに移植した上で, RELの阻害剤を投与することで同経路への介入が癌治療として有効かどうかの検討も行う予定である.
現在までの達成度 (区分)	現在までの達成度 (区分) 3: やや遅れている理由低酸素条件を再現する実験環境設定に想定以上に時間を要したため。
今後の研究の推進方策	低酸素条件での培養環境設定が得られたので、HIF-1α、ANKRD37、RELのKO、または阻害剤添加環境での細胞増殖の比較検討をウエスタンブロットやRT-PCRで評価する予定である。IRB承認後は、手術組織の低酸素マーカーや遺伝子発現状況をIHCで確認する。また喫煙者と非喫煙者でのHIF-1αの発現の差異を検討する。胃癌細胞株をマウスに移植し、RELの阻害剤を投与する検討も行う。
次年度使用額が生じた理由	低酸素培養環境の確立に想定以上に時間を要したため、その後の研究の進度が遅れているためであり、その後の研究は予定通りに行うこことなるため次年度使用額が生じた。