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本研究課題では、Western Dietおよび高濃度糖水経口投与と少量CCl4腹腔内投与を併用して作成したNASHマウスモデルを用いて、SHED-CMの肝臓における炎症・線維化に対する効果、さらには腸管透過性に対する影響について検討した。NASHマウスモデルにおいて、SHED-CM は肝の組織学的炎症と線維化を有意に改善した。肝内遺伝子発現解析においては、SHED-CM によって線維化マーカー(Col1a1、Col1a2)、炎症マーカー(Tnf-α、Ccl-2)の他、Tlr-4 の発現低下を認めた。SHED-CM投与群では、血中 LPS-binding protein濃度の低下も確認され、さらにFITC-dextran を用いた腸管透過性評価によって、SHED-CM 治療は腸管バリア機能を保護することが確認された。回腸における ZO-1の発現はSHED-CM 群で有意に増強しており、tight junctionを保護する作用が示唆された。一方で、次世代シークエンサーを用いた腸内細菌解析においては、SHED-CMによる有意な変化は認めなかった。マウス骨髄由来マクロファージを用いた実験において、Tnf-α・Tgf-β の発現は、SHED-CM刺激群では、他のマクロファージに比べて有意に抑制されていた。SHED-CM刺激マクロファージは、M2表現型の特徴(Arg-1やYm-1など)を持つとともに、Mmp-13の高い発現を示し、抗炎症作用や抗線維化作用を持つユニークな表現型を持つことが明らかになった。さらに in vitro におけるCaco-2単細胞層に対して、SHED-CM処理によってZo-1遺伝子の発現上昇を認め、腸管バリア機能を改善させる作用があることが示された。以上より、SHED-CM が、腸肝相関を介してマウス NASH モデルの線維化を抑制することが明らかとなった。
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